人血浆中缓激肽的SPE LC-MS/MS定量检测方法（二）
使用Oasis WCX提取样品
根据图2所示方案提取预处理的血浆样品。所有溶液按体积计。对μElution板上放置样品的孔实施全部提取步骤。
结果与讨论
质谱分析
在m/z 531和m/z 354观察到缓激肽的2+和3+母离子。缓激肽（图A）和IS（图B）的3+母离子的典型MS/MS谱图如图3所示。在方法开发过程中，记录了一些不同的多电荷母离子和碎片离子。最终使用了缓激肽和IS的3+母离子，因为它们在基质中强度最高且选择性最佳。选择m/z 419.18y31+的碎片离子作为缓激肽定量分析的主要碎片离子。选取3+母离子和m/z 408.18 b41+碎片离子用于确证。对于IS，选择了m/z 344.94的3+母离子和m/z 386.03 b72+碎片离子。最佳MS条件如图2所示。尽管许多肽可以生成小于m/z 200的较强碎片离子，但在提取样品中这些离子（通常为亚胺离子）由于缺乏特异性，会导致高背景噪音。在此检测中，采用m/z值大于其母离子的高特异性b或y碎片离子显著提高了特异性，便于使用更为简单的LC和SPE方法。
UPLC分离
与小分子不同，肽在全多孔颗粒中的传质性能较差。因此，在生物分析研究常用的较高流速下，使用实心核颗粒填充的色谱柱可获得更清晰的峰形2,3。与全多孔颗粒色谱柱相比，在使用CORTECS UPLC C18色谱柱时，缓激肽所得到的峰宽更窄、拖尾现象减少、峰高和峰面积更大。利用CORTECS UPLC C18色谱柱得到的缓激肽和IS的峰宽为2.5-3.0秒，而在全多孔色谱柱中峰宽为4秒。使用CORTECS UPLC C18色谱柱得到的缓激肽和IS的典型色谱图如图4所示。
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