检验与临床（二）

   （四） 样本采集及运送

    1、样本采集时间

    若对同一病人作多次测定最好每次在同一时间收集标本，便于比较，以减少人体内各分析物昼夜变化的影响。昼夜变化有内在因素（主要取决于人是在活动还是在睡眠状态），以及外来因素（如饮食、体育活动或其他和某一特定时间有关的活动）。

  血样标本采集理想的时间是早晨7：00到8：00，尤其在目的为监测时，最后一次食物和液体摄入应在前一天下午6：00到7：00；对于某些试验要有特殊的说明。如做糖耐量试验或餐后两小时血糖的病人，一定要详细告诉病人何时抽血等事宜。

    2、采样系统的使用

    长期以来，我国临床生化采血没有统一的器材，有的使用经反复洗涤的玻璃试管，有的使用一次性塑料试管，使用中存在不少问题，如试管洗涤不干净造成溶血或残存物质对测定的干扰；软质塑料试管采血，血液自然凝固析出血清时间长，容易造成血清中被检成分的改变，如葡萄糖酵解、酶活性降低、细胞中钾离子外溢等。

  血样标本最好采用真空采血系统，这是保证质量的重要措施之一。目前推广使用真空采血系统可有效避免用错抗凝剂，保证了血与抗凝剂比例，解决了交叉污染，防止标本溶血，加分离胶还可加速血清分离等有效措施。真空采血系统采集血液后，应轻轻颠倒混匀5~10次，以确保抗凝剂和促凝剂（分离胶）发挥作用。

    3、正确使用抗凝剂
  
    目前常用的抗凝剂有肝素、EDTA盐和枸橼酸盐，实验室应正确使用相应的抗凝剂，且标本采集时应注意血液与抗凝剂的比例。

   （1）肝素：通常用肝素锂，浓度为14.3IU/mL血，用量范围为12~30IU/mL，常用于血粘度测定，血气酸碱分析及酶学检查。

   （2）EDTA盐：通常用EDTAK2，浓度为1.5~2.0mg/dl，常用于全血细胞计数及血粘度测定。

   （3）枸橼酸盐：通常用枸橼酸钠，浓度为109mmol/L或3.8%，主要用于凝血试验（抗凝剂与血液1：9混合，过高或过低，均可影响PT、APTT的结果），RBC沉降率试验（抗凝剂与血液1：4混匀）。

    4、标本的运送

    血液标本采集后应尽快从采血现场运送至实验室，尽快检验，减少标本的放置时间，因为细胞的代谢、光学、化学反应、微生物分解及其蛋白质酶的裂解都将对生化检测结果产生影响。

    目前，多数医院住院病人的血液标本都是由夜班护士完成采血，由于工作的特殊性，任务重、时间紧，大多数护士采集时间在早晨5~6点，而检验时间在上午9~10点开始，这样无疑就耽搁了四五个小时。血标本的化学成分在放置后可有某些变化。

    如标本放置时间过久，可由于糖酵解而导致血糖下降；有些物质可以通过红细胞膜或由于红细胞的破坏而进入血浆，如红细胞内钾、乳酸脱氢酶、转氨酶、碱性磷酸酶等；血浆中无机磷可由红细胞内有机磷酸酯水解而增加，因此测无机磷时应及分离血清；有些不稳定的酶放置后易失活，如酸性磷酸酶等。因此，常规生化标本采集后应由专人及时收取或送检，急诊标本随留随送。采集后的标本放置时间越短，结果的变异就越小。

    如标本确实不能及时检测，必须贮存时，应：

   （1）防止蒸发：血标本应贮存在密闭的容器中，即使贮存在冰箱内，蒸发的危险性 依然存在。
   
   （2）血标本贮存的温度越低，血样保存时间越长。但是特殊指标如血液形态学指标除外。
  
   （3）血样保存应竖立放置以加快凝血。

   （4）避免晃动血样，以免产生溶血。
 
   （5）贮存时注意避光，尽量隔绝空气。

   （6）血样深冷冻再溶解后，应重复混匀数次，以防检测物质分布不均。

    全血采取后应尽快自然地使血清（浆）从与血细胞接触的全血中分离出来。一般应于采血后2小时内分离出血清或血浆，以防止血细胞内外多种成分发生变化。血清标本离心前一般要先自行凝集，所等的时间包括凝血和血块收缩时间，通常这个过程大致要30分钟，加促凝剂时凝集可加快，切勿用竹签剥离凝血块，因人为剥离会诱导溶血。
 
    血浆标本的最大优点在于及时检测，而不需要等到血液凝固后检测，而且可以避免血液凝固引起的轻度溶血所导致的错误，血浆标本还可避免血凝过程中RBC释放钾离子和酶，使得钾离子和部分酶增高，另一方面血清标本由于缺乏纤维蛋白原，而使血清总蛋白较低。

   （五）实验室标本的接收与处理

    1、严格执行病人、化验单及标本收集器皿的核对制度，保证无差错。

    2、对检验申请单要认真审核。包括检验项目、诊断以及标本采集时间及采集者的签名等，24h尿液收集要有真实时间记录及总量记录。

    3、收集符合要求的标本：签收人员应逐一检查标本的质量，避免血少或严重污染等，对不合格、但可以接受的样本，签收人员要记录标本的缺陷，对于诸如空管等不可接纳的样本，签收人员应拒绝接受，同时注明拒收原因，并通知临床重新采集标本。

    4、建立标本保管制度：随着标本放置时间的延长，有些成分的变化较大，对不能及时检验的标本，经正确处理后放冰箱（或冰冻）保存；对发出报告的常规标本一般保留1-2天，以备复查。

    5、血清或（血浆）标本的处理方法

    检验科收到临床标本后，应尽快低速离心分离血清或血浆进行测定。45℃水浴10分钟，再3000r/min离心5分钟，即可使LDH、K等显著升高。对血液标本外观观察是判断标本质量的最直观的方法，外观异常有溶血、黄疸、脂血等情形，是引起测定误差最常见的因素。

   （1）标本的离心

    离心分离血清应选择相对离心力（RCF）为1000g~1200g，离心时间为5~10分钟。增加相对离心力或增加离心时间，都易引起溶血。

   （2）溶血标本的处理

    溶血可导致RBC内多种成分的释出，引起对测定方法的干扰，Hb≥0.2g/L，肉眼可见溶血。

    ①间接干扰：Hb的释出，可引起间接的干扰，因Hb在波长为431nm和555nm处有光吸收，若被测物选用与之相近波长作比色分析时，可导致假性增高。处理方法：轻度溶血，同时作血清空白；严重溶血，重留样本。

    ②直接干扰：RBC内含量高的血液化学成分溶血后，这些化学成分在血清中浓度就会增高，避免用溶血标本测定在RBC内含物高的化学成分。如钾、ALP、AST、Bil、CK、LD、ACP等

   （3）乳糜标本的处理

    高脂血症的病人往往可导致乳糜血，为了不影响检测，应对乳糜血进行澄清。具体方法如下：血清和（或）血浆与氟利昂以1：1在玻璃试管中混合。氟利昂在血浆和（或）血清下，180℃颠倒试管3min，使充分混合。然后3000g离心6min。上清液为澄清的血清，中层含沉淀的脂蛋白，下层为多余的氟利昂，澄清过程可重复多次而不影响酶的活性和底物。
 
   （4）胆红素（黄疸）标本的处理

      胆红素的颜色对反应结果为黄色和红色化合物的比色分析有正向干扰，可用样品空白或动力学和双试剂消除。另外，胆红素不稳定，在碱性环境或强光线照射下，转变为胆绿素、胆褐素而褪色，如用碱性苦味酸法测定肌酐，黄疸标本常常会出现负数。另外胆红素还有还原性，对Trinder反应有负干扰，如氧化酶法测定葡萄糖、胆固醇、甘油三脂、尿酸等，可通过进行干扰试验消除恒定误差。

    6、标本保存

    因分析不能立即进行或分析后需要重新检测，样本需要保存。如果是后一种目的，标本可根据下列原则保存而不会产生明显影响。

    1、短期保存

    （1）全血细胞计数（不包括分类）所用EDTA抗凝血可在室温下保存24h。分类计数、涂片应在标本收集后5h内完成。如果用血细胞分析仪对血细胞分类，根据所用的不同的分析系统，标本保存都不应超过8h。

    （2）用于APTT与PT的血小板枸橼酸抗凝血浆，可在室温下保存8h。应在3h内测定凝血因子活力，而且血浆必须始终在4~8℃保存。

    （3）检测酶或底物的血清或肝素抗凝血浆可在4~8℃保存一周，但酶对LD和ACP例外，因LD活力对冷不稳定，ACP只在酸性条件稳定，底物TG例外，因为内源性脂肪酶可分解TG为甘油。

    （4）血浆蛋白：包括免疫球蛋白和特异性抗体，4~8℃可保存一周。如果不超过25℃，标本普通的邮寄是可以的。

    2、长期保存

    长期保存，要求保存温度低于-20℃，溶解必须缓慢，在4~8℃过夜或在水浴中不断搅动。通常在溶解中形成浓度梯度，所以分析前必须充分混匀，必须注意试管底部的沉积物，它们可能由冷球蛋白、异型蛋白或冷沉淀纤维蛋白原引起，如果必要，这些沉淀通过加热重新溶解。