1、室内质量控制
必须对 DNA 和 RNA 分析的各步进行质量控制以避免假阳性和假阴性,保证测定结果的准确性。由于 PCR 测定的高敏感性,所以试剂的生产、实验材料的准备、PCR 本身和实验中的每一步都要求有质控,扩增反应前后的酶反应各步也应有质控,只不过在质控细节上稍有不同。

与实验材料准备有关的质控。对 DNA 提取试剂的效果最常用琼脂糖凝胶电泳来检测,可知所提取的 DNA 是否发生降解。

PCR 反应内质控是阳性质控,并且在扩增产物的存在与否具有诊断价值时特别重要。可以使用对有机体存活所必须的靶基因作质控,这些基因至少以半合子状态存在,因为如果基因组缺乏这些基因,将使有机体致死。

相应 DNA 和稀释液的外加阳性质控可检测反应的质量,还可获得有关 PCR 检测下限和特异性的信息,这些质控必须使用与诊断实验(即患者的标本)所使用的相同的主反应混合液。如果怀疑方法的检测下限不足以检测出主物时,则每一个反应管都必须加扩增质控,如果所使用的核酸与阳性质控一致,这种类型的质控会增加实验受污染的危险,已知拷贝数的载体克隆的靶序列或一段基因组 DNA 比较合适。

外加阴性质控(污染质控 P 在每一个 PCR 实验中都必须设有)应该包括几种阴性质控。通常这些质控是用来指明 PCR 过程中污染出现的阶段,在样品制备的过程中所带的空白反应管。含有样品制备时所有反应液,但是不含可扩增的模板(所谓的模拟制备),如果必要,在核酸制备过程中的各阶段,引入不同的模拟制备,通过这种方式各步可能出现的污染均可鉴定,模拟质控可以评估 PCR 实验的综合质量。

此外,为对吸样过程进行质控,可以水质控样本来代替核酸样本加入至反应管,反应管中含所有的反应成分。实际工作中仅通过水样本来检测污染是否存在的方法是不可取的,因为它不能发现样本处理过程中的污染源,水仅可作为扩增试剂的质控。

在扩增靶 RNA 的 PCR 实验中,应该做省略逆转录的污染质控,通过这种方法可发现以前扩增的 DNA 片段所引起的污染。

2、室间质量评价(EQA)
室间质量评价是由非本单位的机构采用一系列的办法连续地,客观地评价各实验室的试验结果,并发现实验室本身不易发现的不准确性,了解各实验室之间结果的差异,帮助其校正,使其结果具有可比性。这种评价是一种回顾性评价,旨在建立实验室间结果的可比性。

(1)实验室之间比较检验  由两个或几个不同实验室按照预定的条件,对相同或类似的项目或材料的检验进行组织,执行与评价。

实验室间比对检验的目的:

①检查实验室整体检验能力;

②检查实验室工作人员个人检验能力;

③确定检验方法的效果;

④确定样品某一特定的准确度的特性;

(2)室间评价的方式

①派调查员到实验室实际调查的方式。

②派调查员调查的种类  组织人力对室间质评中成绩不合格单位的实地调查也是广泛采用的经验。了解实际存在的问题,给予具体指导,现场解决问题;或将带有普遍性的问题带回来,研究解决问题的办法,使室间质评工作得以良性循环,不断提高。组织室间质评的单位如果不能经常下去进行实地调查,也会使本单位的质评工作停顿不前。重视实地调查,就会使本地区的室间质评工作更适合本地区实际情况,更有实效,能促进本地区检验水平不断提高。

依据预先规定的标准,组织专家进行实地评审,是全面评价该单位的方法。

③发质控物的调查方式  由官方或行业协会权威的技术部门发放质控物,也就是我们通常所称为的“室间质评”。

④室间质评的评分室间质评评分,分为两种类型,一种是定性测定的评分;另一种是定量测定的评分。通过评分来评价实验室检测能力。

3、室内质控与室间质评的关系
室内质控是评估每个实验室的检测结果是否和以前的相似,判定当日结果是否可以被采用。室内质控控制着实验的重复性,精密度。室内质控多借助于室内质控血清进行,每次检验常规样品时,同时进行质控血清检验,借助质控血清检验结果与原预定的可接受限相比较,不满意的结果将被控制。室内质控的目的是使本实验室测定结果趋于稳定。室间质评是不同的实验室检测同一样品的过程。这是一个超出地理范围进行的检验,在许多实验室之间比较某一样品的结果,确认同一样品,并给出一个“正确”答案,是提供准确度的评价、这是一个回顾性的评价,所以在这里使用“评价”,而不是“质控”这个名词。室内质控目的在于控制本室检测的精密度,室间质量评价的目的是控制检测的准确度。二者是相辅相成的工作,缺一不可。