离子交换色谱实验的基本流程介绍

　　预处理和装柱

　　1. 将超纯水与沉降胶按1:3 比例悬浮，轻轻搅匀；

　　2. 将色谱柱固定到设备支架上，链接出口管道，从柱底端进口反向泵入超纯水，排除管道及筛板中的气泡，停泵，然后从出口端放出部分超纯水，保留1~2cm 高度超纯水，封死出口端，然后正向冲洗进口端管道和适配器，排除筛板和管道中气泡；

　　3. 通过玻璃棒引流将悬浮胶导入色谱柱，在柱上端补充部分超纯水，搅匀，装上适配器；

　　4. 将柱出口端与色谱设备连接，以0.2MPa 恒压装柱，装填至恒定的柱床高度，标记柱床胶面位置，关闭泵，松开适配器，降低适配器至胶面下2mm 处，继续装填，待柱床高度稳定后，标记柱床胶面位置，降低适配器至柱上标记柱床位置下2mm。固定适配器，继续装填2~3 柱体积；

　　5. 确定柱体积，测量柱高，计算柱体积及记录装柱时的最大流速；

　　6. 选择最佳线速，用0.5mol/L NaOH 冲洗柱，冲洗3~5 体积；

　　7. 接着用超纯水冲柱，冲洗10 柱体积，至pH 显示接近超纯水pH。

　　柱的平衡

　　 20mmol/L 磷酸盐缓冲液，pH6.5，用10 柱体积平衡缓冲液平衡柱子，直至pH 及电导率监控显示与平衡缓冲液

　　的pH 及电导一致。

　　加样

　　 根据柱体积及装柱的最大流速确定上样流速，上样流速不超过装柱最大流速的75%，同时，上样流速也要尽可能低，

　　保证样品和介质充分发生作用。

　　洗脱

　　 上样结束后，用平衡缓冲液冲洗1~2柱体积，使UV280 响应信号重新回到基线。之后用含有0.5mol/L NaCL 的溶液洗脱，冲洗2~3 柱体积，收集色谱峰。