实时荧光定量PCR的原理简介

　　所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

　　检测方法

　　1.SYBRGreenⅠ法：

　　在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。

　　SYBR定量PCR扩增荧光曲线图

　　PCR产物熔解曲线图（单一峰图表明PCR扩增产物的单一性）

　　2.TaqMan探针法：

　　探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成完全同步。

　　服务流程

　　1.客户认真写好订单，提供待检基因相关信息；

　　2.签订技术服务合同，支付预付款（30-50%)；

　　3.设计合成定量PCR引物（或客户提供文献引物委托本公司合成）；

　　4.DNA/RNA的抽提、定量、RNA反转录；

　　5.PCR预实验，主要检测引物的特异性和扩增效率；

　　6.正式定量实验：对所有样品上机检测；

　　7.实验结果和数据分析，形成报告。