HPLC故障排除：保留时间问题（一）
可能致因
| 预防措施/解决方案 | |
| 减少保留时间 | |
| 键合固定相的损失 （流失） |
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| 固定相上的（存在）活性基团 |
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| 增加流量 （流速） |
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| 柱超载 （色谱柱过载） |
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| 延长保留时间 | |
| 改变流动相的成分 |
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| 键合固定相的损失 （流失） |
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| 减少流量 （流速） |
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| 流动相中存在气泡 |
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| 波动保留时间 | |
| 柱平衡（色谱柱平衡时间）不足 |
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| 流动相成分的变化 |
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| 缓冲能力不足 |
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| 波动柱的温度 （柱温波动） |
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2. 保留变量（时间变动）
如果所有峰（色谱峰）的保留时间均发生了变化，其致因很可能是如下因素发生了变化：流动相的组成、色谱柱的化学性质、色谱柱的温度或流速。
如果等度或梯度流动相在在线式混合中出现错误，也可能导致保留时间出现问题。
下面将简要介绍这些问题来源（对上述每个原因都简述如下）。
2.1.如果操作人员操作不当，则会导致流动相组成的意外变化，例如使用在线式混合系统时，流动相混合物（系统）设置不正确；或替换新批次流动相时，未妥善制备新的流动相（新流动相配制不正确）。
在极少数情况下，会出现流动相组分选择性损失的情况，例如蒸发。
当流动相发生变化时，峰形（色谱峰）通常会向相同的方向移动，以缩短或延长保留时间（保留时间变长或变短）；而相对保留（选择性因子，a）通常会发生变化。
检查流动相组成错误的最佳方法是仔细检查（复查）系统设置；如有必要，应制备新的流动相。
方法文件应包含特定流动相变化影响的相关信息。例如，有机溶剂或pH值的微小变化会对色谱图产生特征（在色谱图体现出特征性的）影响，如分辨率或保留的变化（分离度的变化或保留时间的漂移）。
如果您怀疑设备出现故障，请将色谱柱和流动相移至另一个HPLC系统，然后再次运行。
如果问题依然存在，则问题在于流动相或色谱柱；如果问题不再出现，则可能与其他系统组件或参数相关。
2.2.色谱柱化学（化学性质）变化会在色谱柱的整个生命周期内出现，并且一般会在数周或数月内逐渐变化。柱老化一般伴随着柱背压的上升、保留时间的逐渐变化（漂移）（更长或更短）以及更多的峰拖尾。
更换新柱以确定是否是柱老化导致的问题（可确证色谱柱老化）。
500-2000次注射（进样）的柱寿命是较为理想的；在这一点上，柱成本相较于整体分析，是十分微小的，所以更换新柱的可行性较高（色谱柱在整个分析的成本中所占比例低，因而可以合理更换色谱柱）。
如果色谱柱的使用寿命过短，应仔细检查操作条件，以确保它们适用于该色谱柱。
图5显示了在极端操作条件下，色谱柱寿命较短的示例（缩短的寿命）
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