实验方法原理

ATP → ADP＋Pi

很多 ATP 酶是与膜组分联系在一起的酶，比如氧化磷酸化或离子转运系统。在细胞匀浆中或膜悬浮物中必须测定它们的不溶性。

实验材料 酶样品

试剂、试剂盒 TES-TrisATPMgCl2BSA 溶液十二烷基硫酸钠

实验步骤

在 37 ℃ 下轻轻地振荡培养 1 ml 含有 5～20 ul 膜悬浮物样品的实验混合物，并在一定的时间内（1 min、5 min、10 min，取决于酶活力）停止振荡加入 1 ml SDS 溶液。无机磷酸的生成量根据磷酸定量方法来测定，用 1 min 生成的磷酸的物质的量（umol）来计算酶活力。

注意事项

其他

试剂：

0.1 mol/L TES-Tris，pH 7.5［N-tris（羟甲基）甲基-2-氨乙基磺酸，Mr＝229.3；3.44 g 溶于 100 ml，用 0.2 mol/L 的tris（羟甲基）氨基甲烷（Tris，4.84 g 溶于 200 ml）调节 pH 到 7.5，到 200 ml］

0.1 mmol/L ATP（二钠盐，Mr＝605.2；605 mg 溶于 10 ml 水中）

0.1 mmol/L MgCl2（MgCl2·6H2O，Mr＝203.3；203 g 溶于 10 ml 水中）

BSA 溶液，100 mg 溶于 100 ml

10％（质量浓度）十二烷基硫酸钠（SDS）