胶体金在快速斑点渗滤技术中的应用

ELISA法在临床实验室已得到普遍的应用,特别是用于各型肝炎标志物的检测。但ELISA法由于操作程序复杂,时间较长,需要洗板机、酶标检测仪等贵重仪器。给实验室带来不便。ELISA法需时较长的主要原因,是由于液相中的抗原(或抗体)需经扩散才能与固相上的抗原或抗体反应,不适当地缩短反应时间,将使灵敏度降至临床要求以下。为满足临床快速检测的需要,近年来发展了多种简便、快速的免疫学检测方法,快速斑点渗滤法即为其中一种,其标记物质用胶体金即称为快速斑点免疫金渗滤法(Dot-im2munogoldfiltrationassay),又称滴金免疫法。

快速斑点渗滤法的基本原理仍是间接法或夹心法。间接法测抗体:固定于膜上的特异性抗原+标本中的相应抗体+金标记的抗体或SPA显色(将某一检疫传染病标准抗原固定于NC膜上制成检测试纸,取一滴待检样品滴加到膜上,再滴加金标记的抗抗体)。

夹心法测抗原:固定于膜上的多克隆抗体+标本中待测抗原+金标记的特异性单克隆抗体显色(制备某一检疫传染病的多克隆抗体,固定于NC膜上制成检测试纸,取一滴待检样品滴加到膜上,再滴加金标记的单克隆抗体)。

可根据需要设置不同的检测阅读模式,比如双点模式,如图2。也可以设计成加减号模式。如图3。若需要同时检测多个项目,也可以设计成多项目检测模式。如图4所示的双项目模式。

快速斑点免疫金渗滤法检测速度快,结果观察一目了然,已应用于多种临床检测项目。在大宗动物的出入境检疫和疾病普查中尤其能体现其优越性,不用荧光扫描仪等昂贵的设备,不需复杂的操作,不受实验条件的限制,在操作完成后即可直接观察结果,大大缩短检测时间和劳动强度。

实验结果表明,胶体金的敏感性可达到ELISA的水平。利用金颗粒可催化银离子还原成金属银这一原理,采用银显影剂增强金颗粒的可见性,更可大大提高测定灵敏度,检测下限可低至0.1ng。胶体金免疫印迹技术如此简便、快速,且有相当高的灵敏度,在检验检疫上必有很大的应用潜力。