二氢硫辛酰胺脱氢酶的测定实验_氧化反应
NADH：硫辛酰胺氧化还原酶，硫辛酰胺脱氢酶。
此酶发现于细胞中，游离形式（二聚体）存在，与多酶复合体结合，与丙酮酸脱氢酶复合体、酮戊二酸脱氢酶复合体以及分支的含氧酸脱氢酶复合体相似。
此酶首先被 Straub（1939）发现，由于其在加入人为的电子受体如氰化铁、二氯酚吲哚酚和醌后，可以催化 NAD（P）H 的氧化，由此得名。
| 实验方法原理 |
此可逆反应可以从任一方向检测。氧化型硫辛酸和其氨基化合物是可以购买到的，但是利用简单的步骤就可使其还原。硫辛酸和其氨基化合物都可作为底物，有氨基存在，此酶的活性要强 5 倍。 |
|---|---|
| 实验材料 | |
| 试剂、试剂盒 | |
| 仪器、耗材 | |
| 实验步骤 | 实验所需「试剂」具体见「其他」 0.96 ml 实验混合物
0.02 ml 0.2 mol/L DL-二氢硫辛酰胺 4.0 mol/L 0.02 ml 酶样品 开始加入 0.01 ml 0.1 mmol/L H2O2 溶液 30℃ 时，于 340 nm 处吸收值发生变化，ε340＝6.3×103 l/（mol·cm）。 展开 |
| 注意事项 | |
| 其他 | 试剂： 0.1 mol/L 磷酸钾，pH7.5 0.1 mol/L NAD（游离酸，Mr＝663.4；663 mg 溶于 10 ml 水中） 0.1 mol/L DTE（二硫赤藓糖醇，Mr＝154.2；或二硫苏糖醇，DTT，Mr＝154.2；154 mg 溶于 10 ml 水中） 0.2 mol/L DL-二氢硫辛酰胺（Mr＝207.3；52 mg 溶于 1.25 ml 乙醇或者丙酮。原料溶液浓度的二氢硫辛酰胺不可溶于水中，而且不可溶于酒精。存在醇脱氢酶时，例如天然的乙醇可以与 NAD 反应形成乙醛和 NADH，因此必须排除这个酶的活性，若两者选一，底物必须溶解于丙酮溶液中）。 展开 |
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