核酸酶保护实验
实验材料 | 核酸酶 |
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试剂、试剂盒 | ATP CTP GTP MUTP EDTA NaCl 甲酰胺 Tris-HCl RNase A RNase T1 RNasin DTT UTP T7RNA聚合酶 DNaseⅠ 饱和酚 氯仿 酵母tRNA NaAc 无水乙醇 SDS 蛋白酶K 异丙醇 丙烯酰胺 亚甲双丙烯酰胺 TBE 尿素 过硫酸胺 TEMED |
仪器、耗材 | 低温离心机 恒温培养箱 恒温水浴锅 电泳仪 保鲜膜 |
实验步骤 |
1. 在一个高压过的微量离心管中建立20 μl 的反应复合物如下:
2. 加人5 μg 或10 U 无RNA酶的酶 I,37℃温育15 min。
5. 重溶于50 μl 水,按第4步操作所述重新沉淀两次,最后得到的沉淀以75%乙醇/25% 0.1 mol/l pH5.2的乙酸钠缓冲液洗涤,晾干沉淀并溶解于100 μl 杂交液,取1 μl 计数。
6. RNA以乙醇沉淀,并溶解于30 μl 含5×105 cpm RNA探针的杂交液中,于85℃加热变性5 min,移至设定的杂交温度(30~60℃),温育8 h 以上。
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