如何使用离心机提取植物基因组DNA
如何使用离心机提取植物基因组DNA
植物基因组DNA提取使用什么样的离心机做?具体步骤怎么样？植物组织提取基因组DNA
一、材料www.runwelltac.com
幼嫩叶子。
二、设备
移液器，冷冻高速离心机，台式高速离心机，水浴锅，陶瓷研钵，50ml离心管（有盖）及5ml和1.5ml离心管，弯成钩状的小玻棒。（这时选择设备的时候注意选择那种通用性强的，可以一机配多种转子的离心机，可以大大的降低设备采购成本，比如说我厂生产的TG16台式高速离心机，就有16种转子可供选择，有6*50ml（角转子），16*5ml（角转子），12*1.5/2ml角转子，一款机型都可以配全，省事省钱，方便使用，带冷冻的话选择TGL16台式高速冷冻离心机或者TGL20台式高速冷冻离心机即可，也是可配16款转子的详情参看：www.ytyq.com="">http://www.ytyq.com/product.asp
三、试剂
1、提取缓冲液Ⅰ：100mmol/L Tris·Cl, pH8.0, 20mmol/L EDTA, 500mmol/L NaCl, 1.5% SDS。
2、提取缓冲液Ⅱ：18.6g葡萄糖，6.9g二乙基二硫代碳酸钠，6.0gPVP，240ul巯基乙醇，加水至300ml。
3、80:4:16/氯仿:戊醇:乙醇
4、 RnaseA母液
5、其它试剂：液氮、异丙醇、TE缓冲液，无水乙醇、70%乙醇、3mol/L NaAc。
四、操作步骤：
1. 在50ml离心管中加入20ml提取缓冲液Ⅰ, 60℃水浴预热。
2. 幼苗或叶子5-10g, 剪碎, 在研钵中加液氮磨成粉状后立即倒入预热的离心管中, 剧烈摇动混匀, 60℃水浴保温30-60分钟（时间长,DNA产量高）, 不时摇动。
3. 加入20ml氯仿/戊醇/乙醇溶液, 颠倒混匀（需带手套, 防止损伤皮肤），室温下静置5-10分钟, 使水相和有机相分层（必要时可重新混匀）。
4. 室温下5000rpm离心5分钟。
5. 仔细移取上清液至另一50ml离心管,加入1倍体积异丙醇,混匀,室温放置片刻即出现絮状DNA沉淀。
6. 在1.5ml eppendorf中加入1ml TE。用钩状玻璃棒捞出DNA絮团,在干净吸水纸上吸干,转入含TE的离心管中,DNA很快溶解于TE。
7. 如DNA不形成絮状沉淀,则可用5000rpm离心5分钟, 再将沉淀移入TE管中。这样收集的沉淀,往往难溶解于TE,可在60℃水浴放置15分钟以上，以帮助溶解。
8. 将DNA溶液3000rpm离心5分钟, 上清液倒入干净的5ml离心管。
9. 加入5μl RNaseA（10μg/μl）, 37℃ 10分钟, 除去RNA（RNA对DNA的操作、分析一般无影响，可省略该步骤）。
10. 加入1/10体积的3mol/L NaAc及2×体积的冰乙醇,混匀,-20℃放置20分钟左右,DNA形成絮状沉淀。
11. 用玻棒捞出DNA沉淀,70%乙醇漂洗,再在干净吸水纸上吸干。
12. 将DNA重溶解于1ml TE, -20贮存。
13. 取2μl DNA样品在0.7% Agarose胶上电泳, 检测DNA的分子大小。同时取15μl稀释20倍, 测定OD260/OD280, 检测DNA含量及质量。
[注意] 5g样品可保证获得500μg DNA, 足供RFLP、PCR等分析之用。
