β-果糖苷酶测定
实验方法原理
β-D-呋喃果糖苷果糖水解酶,β-呋喃糖苷酶,转化酶,蔗糖酶。
此酶水解 β-D-呋喃果糖苷中 β-D-呋喃果糖苷残基的非还原端,特别是蔗糖。这是早期生化研究中最热领域之一,Michaelis-Menten 等式就是来自于转化酶的反应。实验利用当蔗糖被切成葡萄糖和果糖的等克分子混合物时,平面偏振光的偏差发生倒转(转化酶)。这个反应可以用偏振仪连续记录,实验是 10 ml 样品在 10 ml 比色皿中测得的,若使用其他比色皿可能发生改变。
实验材料 转化酶
试剂、试剂盒 乙酸缓冲液D-(+)蔗糖碳酸钠
仪器、耗材 分光光度计
实验步骤
实验所需「试剂」具体见「其他」
实验混合物:
恢复到 30 ℃
0.1 ml 转化酶
培养一段时间(1~10 min),并加入 6 ml 1mol/L Na2CO3
在 10 cm 的偏振仪比色皿中测其偏振性
每分钟分解 1 umol 的底物为 1 U 酶。
注意事项
其他
试剂:
0.05 mol/L 乙酸缓冲液,pH 4.62(2.85 ml 乙酸,100%,Mr=60,溶于 800 ml H2O,用 1 mol/L NaOH 调至 pH 4.62,补充到 1 L)
0.3 mol/L D-(+)蔗糖(Mr=342.3;10.3 g 溶于 100 ml H2O)
1 mol/L 碳酸钠(Na2CO3·10 H2O,Mr=286.1;28.6 g 溶于 100 ml H2O)
从酵母中提取的转化酶(约 300 U/mg)