液相色谱法检测大霉素普鲁卡因维B12颗粒中维生素B12含量
庆大霉素普鲁卡因维B12颗粒为复方制剂，其组分为每袋含硫酸庆大霉素20mg；盐酸普鲁卡因0.1g；维生素B12（Vitamin B12，V B12）0.02mg。所用辅料包括甘露醇、阿司帕坦、食用苹果香精、羧甲基纤维素钠和柠檬黄。其中V B12的含量极低，难于准确定量。目前，国内尚无检测庆大霉素普鲁卡因维生素B12颗粒中微量V B12的含量测定方法，国外药典也未见收藏。国内用于检测V B12的方法多采用微生物法；不少文献报道使用HPLC法测定微量的V B12，多由于灵敏度不够等原因，无法准确检测药品中的微量V B12；此外，近些年国内外已有文献报道使用电化学方法测定B12的含量，但方法复杂，繁琐。
快速分离液相色谱（Ｒapidresolutionliquidchro-matography，ＲＲLC）是近年来迅速发展的液相色谱新技术，其原理是通过增加液相系统耐高压性能，降低色谱柱固定相粒径、色谱柱内径及长度，从而提高色谱柱柱效，实现缩短分析时间，提高分离度和灵敏度的目的。
可采用ＲＲLC法测定庆大霉素普鲁卡因维生素B12颗粒中微量V B12的含量，方法简便、快速、准确，灵敏度高。
所需仪器：快速分离液相色谱仪（配G1312B二元泵，检测器，柱温箱，脱气机，500μL扩展进样环及色谱工作站）。
色谱条件：（3.0mm×150mm，1.8μm）；流动相：0.005mol/L磷酸二氢钾溶液（每1000mL加磷酸0.5mL）－甲醇（75∶25），流速：0.5mL/min。检测波长：361nm，柱温：40℃，进样量：200μL。
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