肿瘤NGS大panel检测的标准化及研究进展(三)
目前,WES和NGS大panel检测产品在TMB计算规则方面尚无定论。希望厂家在开发NGS大panel的时候考虑到TMB的计算规则是如何拟定的。
这是国家TMB参考品,制定的突变类型,包括a-j不同的突变类型,并规定了TMB计算需要纳入的突变类型:WES:TMB计算纳入a-f突变类型;FMI:TMB计算纳入a-j突变类型;MSKCC:TMB计算纳入a-i突变类型;以上三种,需另外去除驱动突变。GPv2:TMB计算纳入a-j突变类型;GPv3:TMB计算纳入a-j突变类型;
并需另外去除驱动突变。
中检院做的NGS大panel TMB计算方法与WES的线性回归曲线,可以发现两者的一致性比较好。
中检院利用TCGA数据进行的TMB数据拟合,可以发现,不同TMB计算规则,相同芯片区间,产出的TMB差异较大。
此外,中检院使用相同的TMB计算规则,发现在相同的芯片区间,限定下癌种的回归效果也不尽相同。
对于TMB检测性能评价,主要考虑以下几个方面:
1,突变位点检测准确性评价;
2,TMB检测一致性评价;
3,和WES一致性评价;
4,和具有临床药效样本检测一致性评价。
考虑突变频率AF的情况,1% AF的情况下,肿瘤细胞的含量越高,TMB的准确性越高。
国家TMB标准品,对WES标准TMB值计算时的AF值进行了考虑,因为每家公司的AF值是不一样大的,有的1%,有的5%,所以每家公司可以根据自家的AF标准来选择计算WES标准TMB值。如果是1%那么就选择第一列的来计算;如果是5%那就选择最后一列来计算。
国家参考品的考核形式:获取TCGA MC3数据集,计算WES TMB并去除0-TMB样本,最后是6,701个样本,然后模拟panel检测结果并计算panel TMB值,相关分析包括P和S系数;然后建立回归分析方程,再将获取的标准品panel TMB值代入回归方程,计算WES TMB的预测区间(90%),如果你的WES TMB值落入在预测区间中,那么你的TMB检测是准确的。
国家参考品盘的验证结果,对panel A(A+B),C,D的TMB计算进行了分析,分析的肿瘤细胞含量包含了1%,2%,5%和10%,发现TMB的值均落入90%的预测区间内,同时进行了ROC分析,发现准确性和特异性均较好。
国家参考品盘的验证结果,AF为1%,2%,3%,4%和5%,肿瘤细胞含量为1%,2%,5%和10%,主要提醒大家在开发的时候需要注意自己检测产品的AF阈值。
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