分析测试百科网 > 行业资讯 > 技术原理

蛋白质组与蛋白质组学简介-1

2020.9.01

一、蛋白质组概念：

一个细胞、一个组织或一个机体全部基因所表达的全部蛋白质。

二、蛋白质组学研究范畴

1.蛋白质和蛋白质间

2.蛋白质和核酸之间

3.蛋白质及其组成质点的分离、分析、鉴定

4.蛋白质结构分析

5.生理、病理或不同发育状态下蛋白质组表达差异

6.蛋白质信息库

三、蛋白质-蛋白质

1 蛋白质亚基聚合：构像改变；四级结构

2 交叉聚合：同工酶（LDH）

3 分子识别：（如抗原-抗体）

生物大分子间特异性、专一性的识别和结合；构像互补或构像变化产生互补的结构域；化学基团相互间存在足够的结合力。

4 分子自我装配：大分子的相互识别和结合

5 多酶复合体：多种酶相互结合形成一种新的结构。如丙酮酸脱氢酶

四、蛋白质间的相互作用力

蛋白质内部：肽键

蛋白质间：非共价键、氢键、范德华力、疏水键、离子键

五、蛋白质相互作用研究方法

1.酵母双杂交系统：灵敏度较高的蛋白质间相互作用的方法。

酵母杂交系统包括：转录调控区、报告基因和一对反式作用因子。

N端：报告基因转录因子特异DNA结合区；C端：调控目的基因转录的反式作用

因子proteinX

N端：报告基因转录因子转录活化区； C端：调控目的基因转录的反式作用因

子proteinY

protein X+protein Y 报告基因转录

2.噬菌体展示：

研究基因工程蛋白质间相互作用的方法。抗体基因文库和随机多肽构建，用于筛选基因工程抗体和多肽药物。也可以使用于体内蛋白质的相互作用的研究。

3 生物传感芯片质谱

定性和定量检测蛋白质间相互作用的方法。以表面等离子激原共振为基础的生物分子相互作用的分析技术与质谱技术的结合。

１×１cm２芯片，以玻璃为支持物，上面固定羧甲基葡聚糖聚合物，将一些蛋白质（肽）固定在上面。蛋白质或肽样品流过固相支持物，从而将发生相互作用的蛋白质滞留在聚合物上。蛋白质量的增加，使入射光折光率改变，引起共振角改变。

蛋白质量与共振角呈线性关系。

该法快速、灵敏、特异，需要的蛋白质样品量１-１０μg ，检测水平可达到非摩尔，精确度可达０.１％，检测时间只需要１０分钟。

4 蛋白质工程中的定点诱变技术

通过蛋白质定点突变，改变特异功能域，研究蛋白质的哪些结构对功能产生影响。从而发现与疾病相关的蛋白质。

六、蛋白质-核酸相互作用

1.凝胶滞后实验

蛋白质可以与末端标记的核酸探针特异性结合，电泳时蛋白质－核酸的复合物

比无蛋白质的探针在凝胶中泳动速度漫，表现为相对滞后。

聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白质-核酸结合的简单、灵敏方法。可以检测到微量序列特异性DNA结合蛋白。既可以检测ＤＮＡ结合蛋白，又可以检测ＲＮＡ结合蛋白质。可以鉴定这种结合是否是特异性结合。在反应体系中加入非标记的探针，序列相同，那么两种探针与蛋白质的结合存在竞争性机制，随着竞争剂的增加，标记探针与蛋白质结合的带型逐渐变小或消失，证明此种结合为特异性结合。

2 滤膜结合法

硝酸纤维素滤膜不能结合双链DNA，但可以结合蛋白质，可以将与蛋白质结合的DNA片段与游离DNA片段分离开来的方法。

互联网

喜欢作者我要约稿