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PCR反应过程示意图

2021.8.06

聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)是体外酶促合成特异 DNA片段的
一种方法,为最常用的分子生物学技术之一。典型的 PCR 由(1)高温变性模板;(2)引
物与模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反应组成一个循环,通过多次循环反应,使目的
DNA得以迅速扩增。
其主要步骤是:将待扩增的模板 DNA 置高温下(通常为 93℃-94℃)使其变性解成单链;人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因两侧的两条单链互补结合,两个引物在模板上结合的位置决定了扩增片段的长短;耐热的 DNA聚合酶(Taq 酶)在 72℃将单核苷酸从引物的 3’端开始掺入,以目的基因为模板从 5’→3’方向延伸,合成 DNA的新互补链。

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