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western-blot实验常见问题及解答
常见问题 解决对策western-blot实验常见问题及解答
两块玻璃板之间灌胶，胶总是不平 玻璃没有洗干净，应该洗得很干净
过硫酸铵和TEMED加量相对较多
加完试剂后应摇匀
总是漏胶 避免玻璃边缘（与胶条接触处）破损
将两块玻璃板摆放对齐，底部处于同一平面
膜上有明显气泡 操作时将气泡完全排除
靠膜一侧的滤纸应铺平
特异性低 优化一抗
提高一抗和二抗的稀释度
降低SDS-PAGE中蛋白的上样量
背景高 优化封闭液
优化洗涤缓冲液，增加洗涤次数
减少曝光时间
信号低 优化一抗
浓缩样品
选择更高灵敏度的发光液，如enlight等。
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