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影响ELISA试剂盒中非特异性显色缘由剖析

2019.11.29

影响ELISA试剂盒中非特异性显色的缘由许多,如试剂盒特异性、查验标本中含酶符号物的干扰物,操作进程中的疑问。这篇文章就这一缘由作一简明剖析,以便可以经过以上方法把非特异显色降至zui低极限,然后跋涉检测的特异性,并得到更准确、可靠的试验作用。查验标本中富含酶符号物的干扰物包被物的纯度。

在酶联免疫测定尤其是直接ELISA中,试剂的特异性取决于运用抗原的纯度。当时由于技术条件的绑缚,包被用抗原或的纯度不可以抵达100%,所以有些非特异性显色不可避免,只能尽可以跋涉纯度特异性。当时运用的包被抗原一般为组成多肽抗原。 包被的效价具有高亲和力和高特异性的包被抗体,是挑选试剂特异性的重要方面。

内源性干扰物:类风湿因子(RF)、黄疸等,类风湿因子是可作用于多种动物以及人IgGFc段的自身抗体,大都为IgM类,能充当抗原成分与固相及酶标抗体反应,然后呈现非特异性显色。 黄疸血标本中常富含内源性过氧化物酶,如用辣根过氧化物酶为符号物,就有可以发生非特异性显色。

外源性干扰物,常常因样品搜集、贮存、处置不当构成如样品溶血,被细菌污染,标本凝集不全等。溶血标本,红细胞溶解分裂,释放出血红素构成,而血红素中的铁卟啉是过氧化物酶的类似物,以HRP为符号的ELISA测定中,溶血标本可以会增加非特异性显色。如有细菌污染,菌体中可以富含内源性HRP,有国内报道酶免HAg试剂检测溶血标本时可构成假阳性。如在冰箱中保管过久,其间的IgG可发生聚合,在直接法ELISA试剂盒中可使本底加深。因而,血标本在搜集处置时应留神,在冰箱中保管不易过久。

ELISA试剂盒是ELISA中重要的一步,意图是关闭固相载体表面尚未被所占有的空位,减少后续进程中非特异性蛋白的干扰。


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