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去蛋白终点法测定血清肌酐(Cr)实验

2020.8.10

试剂、试剂盒 苦味酸溶液氢氧化钠钨酸溶液聚乙烯醇浓硫酸

实验步骤

一、实验试剂:


1. 0.04mmol/L苦味酸溶液:苦味酸(AR)9.3g,溶于500ml蒸馏水中冷却至室温。加蒸馏水至1升,用0.1mol/L氢氧化钠滴定,以酚酞作指示剂,根据滴定用蒸馏水稀释至0.04mol/L贮存于棕色瓶中。


2. 0.75mmol/L氢氧化钠:氢氧化钠(AR)30g,加蒸馏水少许使其溶解,冷却后用蒸馏水稀释至1升。


3. 35 mmol/L钨酸溶液:


① 100ml 蒸馏水中加入1g聚乙烯醇,加热助溶(不能煮沸)冷却。


② 300ml 蒸馏水中加入11.1g钨酸钠,使完全溶解。


③ 300 ml 蒸馏水中慢慢加入 2.1ml 浓硫酸冷却。


于 1 升 容量瓶中,将①液加入②液中,再与③混匀。再加蒸馏水至刻度,置室温保存至少可稳定一年。


4. 10 mol/L肌酐标准贮存液:肌酐(MW,13.12)113mg用0.1mmol/L盐酸溶解,并移入100ml容量瓶中,再以0.1mol/L盐酸稀释至刻度,保存于冰箱内稳定一年。


5. 10μmol/L肌酐标准应用液:准确吸取10mmol/L肌酐标准贮存液1.0ml加入1000ml容量瓶内,以0.1mol/L盐酸稀释至刻度,保存于冰箱内。


二、 实验操作:


于16mm×100mm试管中,置血清(或血浆)0.5ml,加人35mmol/L钨酸溶液4.5ml,充分混匀。30O0r/min,离心10分钟,取上清液,按表3-6-4测定


尿液标本用蒸馏水作1:2O0稀释后,亦按表测定


混合后,室温放置15分钟,分光光度计510nm波长,比色杯光径1.0cm以空白管调零。读取各管吸光度


三、计算:


血清(浆)肌酐μmol/L=测定管极光度/标准管吸光度×100


尿液肌酐μmol/L=测定管极光度/标准管吸光度×100×200×24小时尿量(L)


参考值:男性44-133μmol/L(0.5-1.5 mg/dL)


女性 70-106μmol/L(O.8-1.2 mg/dL)


注意事项


1. 温度升高时,可使碱性苦味酸溶液显色增深,但标准液与测定的增生程度不成正比例,因此测定各管温度均需升室温。


2. 血清(浆)标本如不当时定,可于冰箱保存3天,只能保持较长时间宜-20℃保存,轻微溶血标本对测定肌酐影响,可使肌酐结果偏高。


3. 肌酐测定的回收率受无蛋白溶液的PH影响,溶液PH在3-4.5时,回收率为85-90% PH2时回收率100%。


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