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手把手教您用Cytek全光谱流式细胞仪检测多重细胞因子

2021.3.02

一入十一月，除了秋高气爽的好天气外，我想到的最多的便是“双十一”了。在这个特殊的日子里，各大试剂厂商都会有一些降价促销的活动。作为检测细胞免疫状态很重要的指标，多重细胞因子检测现在越来越受到很多老师的欢迎。为了让各位老师能够更好地完成这个实验，我们在这里献上一篇使用Cytek全光谱流式细胞仪检测多重细胞因子方法的福利。不久前，Cytek公司与Biolegend的国内总代理达科为生物技术有限公司一起在上海市第一人民医院举办了流式培训班。

这次培训班共有约60名学员，培训的内容包括理论指导，样本制备，上机操作以及数据分析。理论培训中，Cytek公司的科技总监沈红梅博士与达科为公司的技术支持介绍了全光谱流式的原理、多色应用、多重细胞因子检测的方法等内容。

样本制备和上机操作部分
参加培训的学员共分为四组，完成了16色样本，磁珠分选及多重（8种）细胞因子检测等样本的制备，并在3激光Cytek Northern Lights^TM全光谱流式细胞仪上进行了收集。很多学员反馈用Cytek全光谱流式细胞仪检测多重细胞因子，操作非常简便。而且多色样本中CD4+CD25+CD127^low的调节T细胞分群非常清晰，体现了光谱流式对于弱表达标志物的卓越分辨率。

在数据分析的部分
学员们通过使用De Novo^TM FCS Express 6软件对多色实验的光谱流式数据进行了分析，并完成了t-SNE分析图的绘制。此外，还通过使用Biolegend公司的LEGENDplex^TM软件对多重细胞因子检测的光谱流式数据进行了分析处理，得到的标准曲线R²都高于0.999，表明具有较高的拟合度。

下图为利用Cytek全光谱流式细胞仪检测得到的多重细胞因子结果图，使用B4/PE作为报告通道，R1/APC用于因子分类通道。Beads A门中包含5个细胞因子的群体；Beads B门中包含3个细胞因子的群体。如果想了解检测多重细胞因子具体步骤，请点击下方“阅读原文”。任何一台具有蓝色和红色激光的Aurora或Northern Lights 全光谱流式细胞仪都能用于这个应用的检测。

经Cytek全光谱流式细胞仪检测的多重细胞因子的流式数据（FCS files）可以导入LEGENDplex^TM分析软件进行分析，下图为8个标准品的光谱流式数据经过软件分析拟合的标准曲线，其中除了IL-10标准曲线的R²为0.999外，其余因子均为1，R²越接近于1代表标准曲线拟合度越好，样本检测值会越准确。这个结果也反映了光谱流式在多重细胞因子实验中较高的准确度和灵敏度。图中横坐标表示浓度单位，以对数形式显示。如果想了解具体的LEGENDplex^TM软件分析多重细胞因子检测结果的方法。