钙指示剂在GPCR和钙离子通道功能分析的应用
用于GPCR和钙离子通道功能分析的一系列钙指示剂（二）
将所有的钙离子绿色荧光探针放在一起，它们的激发发射光线有多大差异？哪款产品的相对亮度更高？细胞内保留时间更长？细胞加载时间更短？AAT Bioquest最亮的绿色钙离子荧光探针的性能如何？感兴趣的朋友一起来看看吧！
绿色钙离子荧光探针的比较
| 产品名称 | Ex/Em(nm) | (信号背景比)S/B | 相对亮度 | 细胞内保留 | 加载时间 | 其他 |
| Fluo-3 | 506/526 | 2 | 50 | 相比最低 | 1 h | 在相同条件下，Calbryte探针的亮度明显更高 |
| Fluo-4 | 494/516 | 4.5 | 100 | 低 | 1 h | |
| Fluo-8 | 490/514 | 4.5 | ~200 | 低 | 0.5-1 h | |
| Cal-520 | 492/514 | 9.0 | ~150 | 高 | 1-2 h | |
| Calbryte-520 | 490/514 | 10.0 | ~350 | 高 | 0.5-1 h |
Calbryte-520的主要功能：
1.异常明亮
2.在细胞中比Fluo-3和Fluo-4大大提高了信噪比
3.明显增强的细胞内保留（减少甚至消除了丙磺舒的使用）
4.更快的细胞加载
图1.各种绿色钙离子荧光指示剂对比图。
Calbryte 520与市售的其他绿色钙离子指示剂的各类数据对比
内源性Gq的钙含量测定---Calbryte 520 vs. Fluo-4
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图2.用荧光显微镜ATP诱导CHO-K1细胞内源性P2Y受体反应。Calbryte 染料产生更亮的信号，更高的信噪比，并大大增强了细胞保留能力。
外源Gq的钙含量测定---Calbryte 520 vs. Fluo-4
Calbryte 520无丙磺舒免洗试剂盒与FLIPR Calcium 4检测试剂盒数据分析
图3.CHO-K1细胞中内源性P2Y受体对ATP的荧光信号响应的比较。 将CHO-K1细胞以50,000个细胞/ 100 µL /孔在黑色96孔板中接种过夜。 使用Screen Quest Calbryte 520无丙磺舒和免洗的钙测定试剂盒（红色），FLIPR钙4测定试剂盒（蓝色）和Fluo-4直接钙测定试剂盒（绿色）测量钙通量响应。 FlexStation 3添加了ATP（50 µL /孔）以达到最终指示的浓度。
Calbryte 520和Fluo-4在GPCR（Gi）靶向难标记受体中的应用数据对比
图4.Rantes在Flexstation中刺激了趋化因子受体5（CCR5）瞬时转染的CHO细胞（Cat＃38105）中的钙反应(注：上方，深绿色线条为Calbryte 520；下方，浅绿色线条为Fluo-4)
Calbryte 520与GPCR（Gi）目标间接cAMP检测的应用
图5.嵌合G蛋白（Gqi，Gqo，Gqs，Gqz）或混杂G蛋白（Gα16）可以与Gi，Go或Gs蛋白偶联受体结合，产生外源性细胞内钙信号。 |
图6.使用Calbryte-520 PBX NW试剂盒（#36318）在CHO-Ga16-NOP细胞（#38100）中测量了伤害感受肽刺激的钙反应。 |
