原代细胞培养之取材
取材作为原代细胞培养过程中的第一部至关重要,以下几种取材技术,你都用过哪些方法呢?
各类组织取材,操作及注意事项:
1.皮肤和粘膜
主要取皮片,面积一般2~4平方厘米。
2.内脏和实体瘤
1)无菌环境;
2)熟悉所需组织的类型和部位;
3)要避开破溃、坏死液化部分,以防污染,尽量去除混杂的结缔组织。
3.血液细胞
一般多抽取静脉外周血,或从淋巴组织中(如脾、扁桃体、胸腺、淋巴结等)分离细胞,取材时应注意抗凝。
4.骨髓、羊水、胸/腹水细胞
严格无菌,注意抗凝,还要尽快分离培养,离心后,用无钙、镁PBS洗两次,再用培养液洗一次后即可培养,不宜低温存放。
5.动物组织取材——鼠胚组织
1)用引颈或气管窒息致死法处死孕期合适的动物;
2)将其浸泡在含有75%酒精的烧杯中,5分钟后取出动物;
3)在消毒过的木板上可用无菌的图钉或大头针固定四肢,切开皮肤;
4)用无菌操作法解剖取胚。
6.动物组织取材——幼鼠胚肾(或肺)
幼鼠采用上述方法处死消毒后→腹部朝上固定在木板上,先切开游离毛皮并拉开至两侧→采用无菌法打开胸腔取肺,或从背部打开腹腔取肾。
7.鸡(鸭)鸟类胚胎组织
1)取孵化至适当胚龄(9~12天)的胚蛋,用照蛋灯在暗处灯检,若有丰富血管、胚体有运动的胚蛋,说明胚体发育良好,并用有色笔划出气室和胚体位置;
2)将胚蛋置于蛋架上,先用温水清洗蛋壳,再用75%酒精棉球擦干;
经碘酒、75%酒精消毒后,在无菌条件下采用无菌法用剪刀或镊子打开气室,沿气室边缘去除蛋壳;
3)用眼科镊撕去壳膜,暴露出鸡胚;
4)用弯头镊轻挑起胚头,取出胚胎,放入无菌平皿中,解剖取材。