关于Th细胞检测的酶联免疫点法介绍

　　Schauer等对胞内细胞因子的测定作出综合评价，标本来源包括末梢血单个核细胞、肿瘤细胞、组织细胞等，检测方法常用免疫组化法，主要为碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶（APAAP）技术[6] 和测定mRNA的荧光原位杂交技术（FISH），此外还有显微荧光法，将单个细胞用多聚甲醛固定，皂素渗透后，行间接免疫荧光染色，以及Schauer等[5]介绍的用刺激剂PMA（佛波酯）和Ionomycin刺激细胞，使细胞因子向高尔基体积聚，用BFA或Monensin阻断细胞因子向胞膜外转运，然后用流式细胞仪检测的方法，总的来说 TH1型细胞因子的检测相对容易，因为TH1型细胞能表达大量IL-2或IFN-γ，而TH2型细胞因子如IL-4、IL-5、IL-10的检测相对困难，主要原因是TH2型细胞在标本中的出现频率较低，所以有人建议用CD45RO+ 细胞来代替TH2的检测 [6]。

　　酶联免疫点法

　　（enzme-linked immunospot assay，ELISA）将抗细胞因子抗体包被反应板，加入待测T细胞，孵育一段时间后，加酶标记抗细胞因子抗体的酶作用底物，通过细胞的比色印迹法检测信号，最后通过图像扫描或专用的酶标仪进行分析。ELISPOT法引入生物素，亲合素放大系统后，灵敏度大为提高，在测定产生细胞因子阳性细胞频度方面，与流式细胞仪法相平行，但后者可同时描述细胞性质和其他因子的产生情况，且结果更为客观，ELISPOT法一般双ELISA夹心法灵敏，因为其充分利用细胞因子在细胞分泌部位聚集浓度高的特点，并且ELISPOT法能够对每个细胞的分泌物定量。