荧光定量PCR技术的基本原理

PCR反应过程产生 DNA拷贝数，随反应循环数增加，以呈指数方式增加逐渐转入平台期。在传统PCR中，用终点法对PCR产物定量有不足之处；而RQ––PCR对整个PCR反应扩增过程进行实时检测，并连续分析与扩增相关荧光信号，随反应进行检测到荧光信号变化可绘成一条曲线。因此可在PCR反应处于指数期某一点检测PCR产物量，并由此推断模板最初含量。为方便对所检测样本进行比较，在RQ–PCR反应指数期，首先需设定一个荧光信号域值，这个阈值（threshold）一般是以PCR反应前15个循环荧光信号作为荧光本底信号。

如检测到荧光信号超过此域值被认为是真正信号，它可用来定义样本域值循环数Ct（Ct含义：每个反应管内荧光信号达到设定域值时所经历循环数）。研究表明，每个模板Ct值与该模板起始拷贝数对数呈线性关系，起始拷贝数越多，Ct值越小。

利用已知拷贝数标准品可做出标准曲线，因此只要获得未知样品Ct值，即可从标准曲线上计算出该样品起始拷贝数。