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AFM成像对样品影响

2018.9.07

苯甲酸钠(C6H5COONa),分子量:144.11,分析纯,天津市福晨化学试剂厂生产。Balb/c系小鼠购自中山医科大学实验动物中心;RPMI-1640、胎牛血清(Fetalbovineserum,FBS)及β-巯基乙醇等细胞培养试剂购自GibcoBRL公司。
1.2淋巴细胞的准备
       将Balb/c系小鼠断髓处死,在超净台内无菌分离双侧腋窝、锁骨下、腹股沟浅表淋巴结和肠系膜淋巴结,PBS清洗,去除被膜,机械研磨,于200目不锈钢网筛过滤。收集细胞,用4℃PBS1200r/min离心5min。洗涤细胞2次,重悬于RPMI-1640培养液(含10%FBS及50μmol/Lβ-巯基乙醇),调整细胞密度为1×106/mL。台盼蓝染色观察细胞活力,活细胞数占98%。添加SB溶液至淋巴细胞培养液中,终浓度分别为0wt%、0.05wt%、0.1wt%和0.2wt%。将细胞在24孔板接种后放置于37℃、体积分数为5%的CO2培养箱中培养1h、6h、12h、18h。
1.3样品制备
       分别取与不同浓度SB作用1h、6h、12h、18h后的淋巴细胞,滴于新剥离的云母片上,使其自然铺展,吸附10min,然后用2.5%的戊二醛(日本京都产)固定15min,用蒸馏水冲洗3次,室温自然干燥。
1.4AFM成像
       将制备好的样品置于AFM(AutoprobeCPResearch,Thermomicroscopes公司,USA)的XY扫描台上,用监视器定位所要扫描的样品区域,在空气中室温下利用接触或非接触模式成像。AFM图像仅经过自带软件(IP2.1版)的平滑处理,以消除扫描方向上的低频背景噪音。

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