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细胞的PFA固定实验——悬浮法

2019.4.04

当纯净甲醛在水溶液中溶解时,会自动聚合成长链的多聚甲醛。其长度不一,在水中同时进行聚合与解聚反应。甲醛易溶于脂类物质,因此能穿过细胞膜进入细胞内。用多聚甲醛固定细胞时,能使细胞内的自由氨基基团发生化学交联。当不同的分子发生交联时,形成一网状结构,把细胞的各个结构成分连接起来。

实验材料

细胞悬液

试剂、试剂盒

PFAPBS

仪器、耗材

载玻片加湿盒玻璃染色盘

实验步骤

1.  吸取浓度为2×107细胞/ml 的细胞悬液10 μl,滴于多聚L-赖氨酸包被的载玻片上。置于加湿盒中,使细胞静置30 min。 


2.  将玻片放入玻片架,浸于盛有4%PFA固定液的染色用玻璃盘中,室温固定 20 min。

 

3.  将玻片架移至另一盛有3×PBS的盘中,放置2 min(此步终止PFA固定作用)。

4.  将玻片架移至一新的含1×PBS的盘中,放置2 min。换1×PBS后,再放置2 min。


5.  在盘中相继加换50%、70%、95%、100%乙醇,在毎种溶液中放置5 min 以进行脱水。

 

6.  在空气中使玻片完全干燥,放于有干燥剂的玻片盒中,-70℃存放(可存数周)。

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