康乃馨的离体快繁
仪器 设备和 试剂
培养基 N 6 +1 mg/L 6-BA
剪刀、枪型镊子
量筒、酒精灯、滤纸、蒸馏水、小刷子
95%乙醇、70%酒精、70%酒精棉球、0.2%升汞、甲醛、高锰酸钾、来苏尔
纱布、棉塞、牛皮纸、才培纯、肥皂、酒精喷壶
植物的嫩茎、侧芽、茎尖、叶片、花、愈伤组织上的不定芽、胚状体、 试管 苗等
二、实验材料 康乃馨枝条
三、方法和步骤
1 外植体灭菌 取从市场上购买的康乃馨枝条,去掉大的叶片,剪取带腋芽的节结,用肥皂(洗洁精)清洗表面,再用自来水冲洗
30-60分钟,然后在无菌室(超净工作台)内用70%酒精浸没20-40秒钟(根据材料的木质化程度掌握具体的浸没时间。用0.2%
的升汞溶液浸泡10-15分钟,再用无菌水冲洗3-4次,放入已灭菌的培养皿中的滤纸上待用。
2 接种 先进行无菌室内消毒,用紫外灯照射30-45分钟,地面用低浓度的来苏尔溶液消毒,紫外灯关闭约20分钟后方可进去工作。
超净工作台消毒 开启无菌风开关,让无菌风吹上30-45分钟后方可工作。并用70% 的酒精棉球擦净工作台。
接种时先点燃酒精灯,镊子和剪刀都要先浸泡在70%的酒精溶液中。用酒精灯上灼烧好冷却后的镊子、剪刀取出一个侧芽或小段茎,迅速打开三角瓶口,将材料才插入瓶内,注意材料上下端的极性,不能倒插。在酒精灯边塞回锡箔纸,用记号笔在瓶体上写明日期和材料。
3 培养条件: 25℃光照13小时/天 光强1000 Lux
4 继代培养
5 诱导生根:用低浓度的吲哚乙酸或者萘乙酸或无激素的N 6 培养基诱导生根
6 试管 苗移栽