沉淀反应实验原理、材料和实验方法（3）
五 对流免疫电泳
【 实验原理 】
当抗原和抗体在琼脂介质中电泳时 ，抗体的 PI 比较高，在适当的 pH 值下，抗体带正电荷而抗原带负电荷，故在电场中抗体向阴极方向移动而抗原向阳极运动，直至相遇后形成沉淀线，其原理与双向免疫扩散相同，但具有方法简便，快速及一次电泳可以检测多个样品等特点。
【 实验材料 】
1% 琼脂糖，玻片或培养皿，凝胶打孔器（直径 3mm）,水浴箱， 5μl 微量加样器，抗体，抗原，电泳仪，阳性对照血清，滤纸
【 实验方法 】
1 ）取一张玻璃片，用水冲洗干净后，再用少量 75% 乙醇冲洗，晾干后置于水平台备用。
2 ） 1% 琼脂糖融化， 56 ℃水浴中保温
3 ）吸取琼脂糖铺于玻璃板上，厚约 1.5mm ），制成所需胶板。
4 ）等待琼脂糖凝固后，用打孔器成对打孔，孔径 3mm ，孔间距 3mm 。排距 3mm 。
5 ）在孔中分别加入抗原和抗体，每孔 5 μ l
6 ）在电场中电泳 30 分钟（ 5v/cm ）
7 ）观察结果。在两孔间出现沉淀线的为阳性。
【 结果分析 】
本实验是定性实验，用于多种疾病的检测，如 HbsAg ， AFP 等的检测，血吸虫，包虫病等抗体的测定。
五 免疫电泳
[ 原理 ]
在凝胶介质中将区带电泳法与免疫双扩散相结合的一种免疫化学方法。先使血清在琼脂糖凝胶中电泳，在一定的电场强度下，由于血清中各种蛋白质的分子大小及电荷状态和电荷量不同，泳动速率也各不相同，使各自组分得到分离，然后在电泳轴的平行方向挖一长槽，加入抗血清，抗原与相应抗体扩散，相遇，出现沉淀弧线。
[ 材料 ] 1% 琼脂糖，玻片或培养皿，凝胶打孔器（直径 3mm ），水浴箱， 5 μ l 微量加样器，抗体，抗原，电泳仪，阳性对照血清，滤纸
[ 方法 ]
1 ）将玻璃板洗干净，用 75% 乙醇冲洗，晾干备用
2 ）将 1% 琼脂糖融化， 56 ℃水浴中保温备用
3 ）铺板，打孔。
4 ）将凝胶孔加满抗原，其中一孔加电泳指示剂。
5 ）将凝胶板放在电泳槽中进行电泳 10v/cm ，根据指示剂判定电泳时间。
6 ）电泳后在凝胶板上沿电泳方向平行挖 2mm 左右宽的长槽，其中加入抗血清或特异性抗体。
7 ）将凝胶板转入湿盒中，室温放置 12 或 18 小时，可观察到在一定位置出现的沉淀弧线。
[ 结果与分析 ]
• 临床上常用于 M 蛋白血症，确认该异常蛋白属于哪一亚类免疫球蛋白，或哪一型轻链。
• 鉴定蛋白质抗体，为单价抗体或多价抗体，如检测多克隆丙种球蛋白血症中同时存在的高含量 IgG ， IgA 和 IgM 。
• 鉴定未知蛋白抗原（或抗体）。
