涨知识|徕卡显微镜的七种观察方式之四
4、像差观察(Phasecontrast)
在光学显微镜的发展过程中，相差镜检术的发明成功，是近代显微镜技术中的重要成就。我们知道，人眼只能区分光波的波长(颜色)和振幅(亮度)，对于无色透明的生物标本，当光线通过时，波长和振幅变化不大，在明场观察时难观察到标本。
相差观察：相差显微镜利用被检物体的光程之差进行镜检，也就是有效地利用光的干涉现象，将人眼不可分辨的相位差变为可分辨的振幅差，即使是无色透明的物质也可成为清晰可见。这大大便利了活体细胞的观察，因此相差镜检法广泛应用于倒置显微镜。
相差观察原理：相差显微镜把透过标本的可见光的光程差变成振幅差，从而提高了各种结构间的对比度，使各种结构变得清晰可见。光线透过标本后发生折射，偏离了原来的光路，同时被延迟了1/4λ(波长)，如果再增加或减少1/4λ，则光程差变为1/2λ，两束光合轴后干涉加强，振幅增大或减下，提高反差。在构造上，相差显微镜有不同于普通光学显微镜两个特殊之处。
5、微分干涉观察
微分干涉：(Differentia linterference contrast DIC)：50年代法国光学家诺曼尔斯基改良了沃拉斯顿棱镜，在沃拉斯顿棱镜基础上完善了DIC理论及显微镜中DIC的使用方法
微分干涉原理：通过特制的棱镜将偏振光分解相互垂直，强度相等的光束，光束载极近的两点（小于显微镜的分辨率）有差别，使图像呈现出立体三维感觉
DIC组件：检偏镜，2个DIC棱镜（1个位于聚光镜中，一个位于物镜转盘中）
优点：
可以使被检物体产生三维立体感觉
观察效果更直观
无须特殊物镜
与荧光观察配合能更好调节背景和物体的颜色变化而达到理想的效果啊
缺点：
需要光强高
双折射性物质不能达到DIC效果
不能应用于塑料容器培养物的观察
检测灵敏度有方向性，调节较复杂
主要应用：无色透明活体标本的细微结构，无色荧光标本，染色标本，显微镜操作等
6、荧光
荧光：
物质中的电子吸收的能量由低能状态转变为高能状态，再回到低能状态时释放出的光，是非温度辐射光-冷光。
显微镜荧光利用光源激发-光化荧光
荧光的性质：
吸收光，必须要有激发光源
荧光波长＞激发波长（损失热能）
荧光强度极小于激发光的强度
有不同程度的衰减
荧光强度取决于激发光强度，被检物质浓度，荧光效率
优点：
检出能力高（放大作用）
对细胞的刺激小（可以活体染色）
能进行多重染色
用途：
物体构造的观察-荧光素
荧光的有无，色调比较进行物质判别-抗体荧光灯
发荧光量的测定对物质定性，定量分析
7、霍夫曼观察
霍夫曼观察原理：斜射光照射到标本产生折射，衍射，光线通过物镜光密度梯度调节器产生不同阴影，从而使透明标本表面产生明暗差异，增加观察对比度
优点：
强立体成像效果，无光晕
塑料/玻璃培养皿适用
可检测双折射性物质
聚光镜的工作距离大于DIC
背景与标本的亮度变化可调节
物镜可用于明场、暗场、荧光观察
缺点：调试，适用稍复杂，成本较高
应用：显微操作，内部结构，外部形态观察
至此，徕卡显微镜的七种观察方式就给大家全部介绍完了。
