肝癌患者血清HBV基因型外膜大蛋白定量检测的临床意义

摘要:

目的 探讨血清乙型肝炎病毒（HBV）基因型及HBV外膜大蛋白（LHBs）水平与肝细胞癌的关系.

方法 对61例肝癌、65例慢性活动性乙型肝炎患者及10例HBV携带者的血清HBV基因型、HBV LHBs进行检测.

结果 136例中,B基因型56例（41.0%）,C基因型76例（55.9%）,B、C混合型1例（0.7%）,B、D混合型3例（2.2%）;随病情加重,C基因型比例增加;不同基因型HBV感染的肝癌患者间HBV DNA、HBV LHBs水平存在明显差异;慢性活动性肝炎患者二者无统计学差异.

结论 本地区HBV以B、C基因型为主,不同基因型HBV感染在肝癌的发生中可能存在不同机制.

关 键 词:肝肿瘤；肝炎病毒，乙型；基因型；外膜大蛋白

C lin ica l significance of HBV ge no types and large envelope prote in quantitative defection in hepatocellular carcinoma

WANG Yong-zhong, WU Guo-xiang, QIN You-lai, XU Jian-lan, CHEN Min, PU Xiang-ke （The Third People＇s Hospital of Changzhou, Changzhou 213001, P. R. China ）

Abstract:[Objective] To explore the relation between HBV genotypes, the level of serum large envelope （LHBs） with hepatocellular carcinoma （HCC）.  [Methods] HBV genotypes and HBV LHBs in sixty one HCC patients,sixty  five chronic active hepatitis and ten H13V carries were  detected,[Results] There were 56 （41.0%） B genotypes and 76（55.9%） C genotypes in 136 cases, only one （0. 7%） patients was found with both B and C, and three patients （2.2%）  were found with B and D genotypes HBV in serum, the ratio of genotype C  is in- creased with pathogenetic condition aggravation ; The level of  HBV DNA and HBV LHBs in different HBV infected gene type of HCC had  obvious differences; there was no significant difference in the levels  of HBV DNA and HBV LHBs in chronic hepatitis B（P〉0.05）.  [Conclusion] These results indicate HBV with genotype B and C exist in  our area;and different HBV genotypes could have different roles in the  development from hepatitis to HCC.[著者文摘]

Key words: bepatocellular carcinoma; hepatitis B virus genotype; DNA chips; large envelope protein

    乙型肝炎病毒（HBV）感染可导致急、慢性病毒性肝炎，继之发展为肝硬化及肝细胞癌。HBV可分为A至H八个基因型，文献报道，不同年龄段肝癌患者HBV优势基因型不同^[1]。HBV外膜大蛋白（HBV L HBs）是具有双重跨膜拓扑结构的蛋白^[2]，与病毒复制密切相关。过量HBV L HBs在肝细胞内质网积聚是导致内质网应激的关键因素，并与肝细胞毒性甚至肝癌相关。为探讨HBV基因型及HBV L HBs与肝癌的关系，2005年11月至2006年8月，我们对136例肝癌、慢性活动活肝炎、HBV携带者的临床标本进行了检测。

1  资料与方法

1.1 临床资料  61例肝癌、65例慢性活动性肝炎患者血清标本取自本院住院患者血清资料库，10例HBV携带者血清取自本院体检人群。肝癌病例均经临床、B超、病理检查确诊，慢性活动性肝炎和HBV携带者符合2000年中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会联合修订的病毒性肝炎防治方案中病毒性肝炎的诊断标准。男110例、女26例，年龄（45.83±13.49）。所有血清标本分离后冻存在 -80℃超低温冰箱。

1.2 方法

1.2.1 HBV基因型检测  采用中国科学院上海微系统与信息技术研究所研制的基因芯片检测试剂盒，将待测不同HBV基因型的特征基因片段（靶基因）固定于玻片上制成检测芯片，将从患者血清中抽提出的HBV DNA经PCR扩增标记后与芯片进行杂交，杂交信号由扫描仪扫描，再经计算机分析确认实验结果，具体操作严格按说明书进行。

1.2.2  HBV LHBs检测 HBV LHBs检测试剂应用结构生物学和免疫学技术，筛选出针对HBV大蛋白前S区立体构象型表位的高特异性、高亲和力的单克隆抗体，并在微孔条上预包被，配以辣根过氧化物酶标记抗体，TMB显色，采用双抗体夹心法检测，由全自动酶联免疫分析仪读取并自动分析结果。 

1.3  统计学方法  采用SPSS 13.0软件进行统计分析，不同基因型间HBV DNA、LHBs含量的比较采用t检验。

2 结果

2.1  HBV基因型检测结果  见表1。随病情加重，B基因型比例逐渐降低，C基因型比例逐渐升高，B、C基因型为本地区优势基因型。 

表1  136例HBV感染者基因型检测结果

2.2 肝癌患者血清HBV DNA、L HBs检测结果B、C基因型肝癌患者血清HBV DNA水平分别为（3.6±3.23）、（4.42±2.06）log10cop ies/ml,HBV L HBs水平分别为（57.18±60.77）、（32.77±35.68）μg/L。二者比较，C基因型血清HBV DNA水平高于B基因型（t=11.58,P＜0.05），B基因型血清HBV LHBs水平高于C基因型（t=7.94,P＜0.05）。

2.3 慢性活动性肝炎患者血清HBV DNA、L HBs检测结果 B、C基因型慢性活动性肝炎患者血清HBV DNA水平分别为（5.89±2.40）、（6.15±1.47）log10 cop ies/ml,HBV L HBs水平分别为（130.0±84.2）、（132.8±79.3）μg/L;两基因型比较均无统计学差异（t=2.80,0.08;P＞0.05）。

3 讨论

文献报道^[1]，我国台湾地区50岁以上肝癌和肝硬化患者HBV基因型以C型为优势基因型，50岁以下以B型为优势基因型，提示肝癌与基因型有关。有学者发现^[3]，高水平HBV DNA患者肝癌风险增加，C基因型HBV与肝癌风险增加5倍有关，且HBV DNA和基因型之间还有加性作用。 本文结果显示，B、C基因型为本地区HBV感染的优势基因型，C基因型在肝癌患者中的比例明显高于慢性活动性肝炎，且在HBV携带中未检测到C基因型，提示C基因型与严重肝病相关，对HBV进行基因分型有助于判断乙肝患者的预后。

本文结果显示，C基因型肝癌患者血清HBV DNA含量明显高于B基因，B基因型L HBs水平明显高于C基因型；而慢性活动性肝炎患者B、C基因型HBV DNA和L HBs水平均无统计学差异。HBV是引起肝细胞癌的主要因素，目前确认HBV至少可编码两个转录激活因子，HBx蛋白和L HBs蛋白都可诱导c-Raf-1/MEK激酶级联通路激活，其中HBx蛋白依赖Ras介导，而L HBs为PKC依赖性。HBx蛋白和L HBs均由HBV DNA编码，这可能是高水平HBV DNA患者肝癌风险增加的原因之一。另外，HBV LHBs包括HBsAg、PreS1、PreS2蛋白，是HBV Dane颗粒和亚病毒颗粒的主要包膜成份，通常HBV DNA定量检测的是Dane颗粒，而大蛋白定量检测还可检测到亚病毒颗粒，在肝癌患者中出现B基因型HBV感染者，是否与其体内蓄积大量亚病毒颗粒有关，值得进一步研究。

[参考文献]

[1]  Kao  JH,Chen PJ.Hepatitis B genotypes correlate with clinical outocomes in  patients with chronic hepatitis  B[J].Gastroenterology,2001,120:1564-1565.

[2]  Lambert  C,Manns,Prange R.Assessment of determinants affecting the dual topology  of hepadnaviral large envelope proteins[J].J Gen  Virol,2004,85(5):1221-1225.

[3]  Yu  MW,Yeh SH,Chen PJ,et al.Hepatitis B virus genotype and DNA level and  hepatocellular carcinoma:a prospective study in men[J].JN Cancer  Inst,2005,97(4):265-272.