操作前所有试剂都应平衡至室温(~25ºC)并充分混匀。标准品、质控及待测样本需同时做双份。

1.取出实验所需板条，并记录各孔位置。

2.在对应的孔中加入标准品、质控及待测样本各50ul。

3.每孔加入25ul样本稀释液A。

4.每孔加入25ul样本稀释液B。

5.封板，以300-400rpm速度震荡，室温下过夜（14-18小时）。

6.洗板3次，在吸水纸上拍干。

7.每孔加入50ul抗体-生物素结合物。

8.封板，以500-700rpm速度震荡，室温下孵育1.5小时。

9.洗板6次，在吸水纸上拍干。

10.每孔加入50ul链霉和素-辣根过氧化物酶结合物。

11.封板，以500-700rpm速度震荡，室温下孵育20分钟。

12.洗板6次，洗完最后一次以后，将洗液在孔内停留15分钟再除去。在吸水纸上拍干。

13.在每孔中加入100ulTMB底物溶液。

14.以500-700rpm速度震荡，室温下避光孵育15-30分钟。

生长素抑制素的合成

15.每孔加入100ul终止液。

16.30分钟内在450nm处读数。

注：必须以零标准作空白。如果能做到双波长测定，可在600或620nm处读数，将600（620）nm吸收值从450nm处减去，这样可以减少光学误差。