红血球的处理方法
1．新鲜红血球新鲜红血球用阿氏液保存于4℃，可供3周内使用。采用新鲜红血球做凝集反应，模型新鲜，典型，而且敏感性也比醛化红血球高出1～2个滴度。但用新鲜红血球致敏后，保存时间短，而且不同动物个体和不同批次来源的红血球均有差异，影响试验结果和分析。为了克服这一缺点，多采用醛化红血球或鞣化红血球。
2．红血球醛化极其优点
（1）醛化方法：常见的醛化剂有甲醛、戊二醛和丙酮醛。
甲醛醛化过程：①将红血球用pH7.2PBS反复洗涤4次，以除去血清蛋白以及红血球表面的胶体物质；②按1︰8的比例取红血球（压积）和3%甲醛液（用pH7.2PBS稀释，预先冷却至4℃），缓慢混合，加胶塞4℃作用24h，不时摇动；③倾去上清液，再以1︰2（V/V）加入36%～38%冷的（10℃）甲醛溶液，混匀，再放入4℃24h；④⑷离心去上清，以生理盐水反复洗涤4次。彻底清除甲醛液，最后以生理盐水配成10%悬液甲醛化红血球，加1/万硫柳汞防腐，4℃保存。
戊二醛醛化过程：①取新鲜红血球，以生理盐水洗涤4次；②以0.15Mol/L pH 7.2 PBS配成1%戊二醛溶液，4℃保存备用；③将100ml 1%冰冷的戊二醛液加入到10ml～15ml红血球中，边加边搅拌（也可置电磁搅拌器上）30min；④离心去上清，以生理盐水洗涤4次，最后以PBS液（或生理盐水）配成10%悬液，加1/万硫柳汞，4℃保存。
丙酮醛—甲醛双醛化过程：①取新鲜红血球，洗涤4次，配成8%的悬液；②于红血球悬液中加等量的3%丙酮醛室温电磁搅拌16h～18h；③洗涤5次，再配成8%的悬液；④于红血球悬液中加等量的3%甲醛，电磁搅拌16h～18h；⑤洗涤5次，最后以pH 7.2 PBS配成10%的悬液，加1/万硫柳汞防腐，4℃保存。
（3）醛化红血球的优点：①性质稳定，不影响红血球表面的吸附能力；②重复性好，易标准化。③可较长期保存，醛化后4℃保存，有效期可至1年，如冻干保存，有效期则更长。
（4）影响醛化的因素：①红血球的洁净程度：由于红血球表面残留血浆蛋白和其它胶质，易引起自家凝集，所以一定要充分洗净；②红血球的浓度：醛化时应尽量使红血球稀释度低一些，以减少红血球的凝集和变形；③醛化时的温度与醛化红血球的质量有很大关系，一般认为最好是37℃。但有人认为应于4℃进行醛化；④醛化剂的浓度和醛化次数：醛化剂的浓度过大，易引起红血球皱褶，浓度过低，又会增加溶血机会，所以一般以3%醛化浓度为宜。家禽红血球一般醛化1～2次即可，而哺乳动物红血球醛化2次比醛化1次要好，敏感性高，保存时间也长。不同的双醛化，其抗原致敏作用有所不同。
表各种双醛化红细胞的结果比较
双醛化 | 上海第六 人民医院 | 首都 医院 | 国外 资料 | ||||
抗原滴度 | 抗原滴度 | 脉冲/min | 抗原滴度 | 脉冲/min | |||
丙酮醛+甲醛 戊二醛+丙酮醛 丙酮醛+戊二醛 | 2 2 2 | 2 － － | 5107～5118 － － | 2×10 6×10 6×10 | 1684 2154 3750 | ||
脉冲/min是I标记的特异性抗体结合到细胞上的指标，脉冲数越大，结合抗体量也越多。但是从表5－1中可以看出结合量同可测出的抗原滴度是不平行的。
适当的振荡可使醛化剂与红血球充分接触，并可排除凝块形成。但过分地振荡，则易产生气泡，引起红血球变形。
3．红血球鞣化多糖、脂多糖、类脂等一些半抗原易于吸附红血球表面，所以一般醛化处理即可。但对于许多蛋白质抗原，由于不易吸附于红血球表面，所以在醛化的基础上，必须再以一定浓度的鞣酸进行处理，强化它对蛋白质的吸附能力。
有人认为双醛化后可不必进行鞣化。首都医院做了“丙酮醛+甲醛+鞣化”和不加鞣化得出相同的抗原滴度。但多数意见认为醛化后仍需鞣化比较好。
(1)鞣化过程：①将10%醛化红血球用生理盐水洗涤2次，再以0.15Mol/L pH7.2PBS洗涤1次，最后以PBS配成2.50%悬液；②称取优质鞣酸20mg，以生理盐水4ml配成1﹕200的浓度，于37℃水浴，使之充分溶解，然后再以pH7.2PBS稀释成1﹕2 000的浓度。当天配制、当天用完；③1份2.5%红血球悬液与1份1﹕2 000鞣酸液充分混合，37℃水浴10min，1 500r/min离心，去上清，用PBS液洗涤1次；④以0.02%牛血清白蛋白PBS液洗涤1次，最后以牛血清白蛋白PBS配成2.5%鞣化红血球。
（2）影响鞣化的因素：①鞣酸的质量：这是很重要的，所以必须采用优质鞣酸。分析纯的鞣酸呈面包屑状，不呈面粉状，有折光性；②鞣酸的浓度：浓度过高，可以出现红血球的凝集现象；浓度过低，达不到红血球的活化作用。醛化过的红血球所采用的鞣酸浓度一般比新鲜红血球高10倍。通常以1：2 000为佳；③鞣化时间：鞣化过程一般10min～15min即可完成。时间再长也不能吸附更多的抗原，提高血凝滴度。鞣化时采用的pH对吸附抗原和血凝滴度影响不大，一般采用pH7.2的PBS液。
