用于PCR的模板DNA制备实验——酚-氯仿法提取石蜡组织中DNA
模板 DNA 质量直接影响 PCR 结果，是 PCR 成功的关键之一。根据其检测对象（组织细胞材料）的不同，有不同的制备方法，常用的材料有石蜡切片、冰冻切片、血细胞、胸腹水等。
| 实验步骤 | 1. 10 mm 厚石蜡切片 10～15 张，置入消毒后的 1.5 ml Eppendorf 管中。 2. 脱蜡 二甲苯 1200 μl，9000 r/min，8 min×3。 3. 脱水无水乙醇 1200 μl，9000 r/min，5 min×3。 4. 打开 Eppendorf 管盖子，将其置于 37℃ 烤箱中干燥 1～2 h。 5. 加裂解液 100μl，混匀后加 20 mg/ml 蛋白酶 K 15～20 μl，终浓度 10 μg/ml 间隔振荡，55℃ 烤箱中过夜。 裂解液配制：1 mol/L Tris-HCl（pH 8.0）2 μl，0.5 mol/L（pH 8.0）EDTA 4 μl，10％ SDS（pH 7.2）20 μl，加水至 100 μl。 6. 观察裂解液是否清亮，如不清亮，根据组织量补加蛋白酶 K 3～5 μl，继续消化至裂解液清亮。 7. 加 500 μl Tris 饱和酚，混合至乳状。 8. 10000 r/min 离心 10 min，小心吸取上清液。 9. 加酚和氯仿各 250 μl，混匀，10000 r/min 离心 5 min，小心吸取上清液。 10. 加氯仿 500 μl，混匀，10000 r/min 离心 5 min，取上清液。 11. 加 NaAc（乙酸钠，3mol/L，pH 6.0）70 μl，无水乙醇 700μl，混匀，-20℃ 保存 2 h。 12. 10000 r/min 离心 5 min，弃上清液。 13. 加 70％ 乙醇 1 ml，混匀，清洗。 14. 10000 r/min 离心 3 min，弃上清液。 15. 开盖，倒置 Eppendorf 管，室温下干燥。 16. 加 TE 缓冲液（pH 8.0）20～40 μl，55℃，10 min 速溶，置于 -20℃ 冰箱中保存。 |
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