荧光PCR法测猫杯状病毒的检测方法及原理
轻微的猫杯状病毒通常会让猫咪无精打采，有时会出现打喷嚏、口部眼部的分泌物增多等情况。病情严重是会导致猫咪呼吸困难，引起肺部炎症。虽然该病的率很低，但是却有着很强的传染性，需要及时进行诊断。由于多种病毒均可引起猫的呼吸道疾患，且症状具有类似之处，因此诊断较为困难。
猫杯状病毒（FCV）属于RNA病毒，具有高变异性。在猫群中，无毒力或轻度毒力FCV的流行率高达36%。感染后猫体一般会表现为呼吸道病状和口腔溃疡，较少出现系统性病症。
救助所和医院的猫感染后潜伏期是1-5天，家猫感染后潜伏期可能长达12天。这种病在成年猫中更严重。VS-FCV疾病的临床病理特征与“传统”FCV有很大区别，已报道的VS-FCV疾病症状包括持续高烧、厌食、抑郁、面部和四肢水肿、面部耳廓及足部有溃疡或脱毛、肺水肿、凝血异常、胰腺炎、肝坏死。感染VS-FCV比传统的FCV更早表现出病理变化。
诊 断
当猫出现以下情况，VS-FCV的可能性较大。
全身性症状不能用其他原因来解释，包括面部或肢体水肿/大面积结痂/身体、脚、面部耳廓脱毛/皮肤溃疡；
组织活检或尸检发现肝细胞坏死；
成年猫比小猫受影响更严重。
无论是传统FCV还是VS-FCV感染都不能仅根据临床症状进行诊断。FCV有很多症状表现，每一种症状也可能是其他病原体引起的。例如口腔溃疡通常是FCV感染的症状，但猫疱疹病毒同样可以引起口腔溃疡。不正确稀释的季铵和苯酚消毒剂也会导致严重的口腔溃疡，呼吸道症状。
VS-FCV具有快速生长、体外组织培养易于传播、环境稳定性更强的特点。相比于非VS-FCV感染的细胞，VS-FCV感染的细胞保持ATP时间更长。通过维持细胞ATP水平，VS-FCV分离物可以延迟细胞凋亡，产生并释放更多的病毒颗粒。另外，维持细胞内ATP水平可以促进细胞的能量依赖性凋亡和防止细胞坏死。通过限制坏死细胞引起的炎症反应，利于病毒在体内复制。
这里介绍的方法是采用荧光PCR方法，可对口腔、鼻或眼结膜拭子样本中的猫杯状病毒（Feline Calic Virus，FCV）核酸片段进行定性检测，可用于临床对猫杯状病毒的辅助诊断。适用于疑似FCV感染猫的辅助诊断，检测样本为感染猫的口腔、鼻或眼结膜拭子样本。猫杯状病毒检测试剂盒（荧光PCR法）具备基线噪音小、阳性信号明显、反应性好等优点。
检测原理：猫杯状病毒检测试剂盒针对猫杯状病毒保守基因片段设计特异性引物及Taqman荧光探针，该探针能与引物扩增区域中间的一段核酸序列发生特异性结合。在PCR延伸反应中，Taq酶的外切活性将5’端荧光基团从探针上切割下来，使之游离于反应体系中，从而脱离了3’端荧光淬灭基团的屏蔽，分离后的荧光基团在机器特定光源的激发下产生荧光，再由仪器的检测单元进行检测，从而实现对FCV的特异性检测。BIOG试剂盒使用内质控体系，能够实时监测整个检测过程，有效防止假阴性结果的产生。
BIOG猫杯状病毒定量PCR检测试剂盒特点：
基线噪音小，阳性信号明显，非常容易判断阴阳性；
2.灵敏度高，能够检测出感染早期的弱阳性样本；
3.设置有内标，可以监控从提取到RCR检测的全过程，可及时排除假阴性结果；
4.特异性好，与同部位感染的疱疹病毒、支原体、衣原体、波氏杆菌、链球菌、金黄色葡萄菌等病原菌无交叉反应；
5.反应性好，可检出不同基因型的杯状病毒和基因变异的杯状病毒。
