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近红外荧光检测Western blot介绍

2020.2.05

在介绍近红外荧光凝胶成像凝胶成像检测方法之前,我们来回顾下化学发光的历史:WB是目前蛋白检测的主要方法之一,1981年由尼尔·伯奈特(Neal Burnette)所著的《分析生物化学》中首次被提出,一直延续至今,仍有很多忠实的粉丝。 


化学发光检测的优点

灵敏度高,其灵敏度高达fg级别。

从零到一,化学发光的优点深入人心,经历多年考验仍占据一定地位。

化学发光检测的缺点:

随着科研水平的提高,简单的化学发光已经不能满足现在高水平的科研要求。例如:目的和内参要在同一张印迹膜上,信号和蛋白浓度要有很好的线性关系,使用总蛋白归一化等方法,这样传统的化学发光就很难满足要求。

化学发光的信号是动态的,信号会随着时间而发生变化。

化学发光的信号不与目标蛋白的浓度呈线性比例关系。

由于期刊杂志要求的升级,荧光凝胶成像WB隆重登上舞台,特别是近红外荧光凝胶成像检测,成为荧光凝胶成像WB精准定量的金标准:


近红外WB的优点:

精准定量——荧光凝胶成像标记的信号是静态的,信号不会随着时间而发生变化。信号与目标蛋白浓度呈线性比例关系。

信号持久——印迹膜晾干避光保存,信号可持续数月,化学发光仅几小时

可进行多重检测——无需剪膜、跑平行胶和剥离膜,对于共迁移条带如磷酸化和非磷酸化检测优势更明显

节约成本——二抗可重复使用,稀释比例高,无需化学发光检测的胶片,显影液,定影液和显色底物

要想完成近红外荧光凝胶成像多重检测,需要带有近红外光源的多功能分子成像系统。

那市面上成像产品那么多,我们究竟该怎么进行选择?

最新的多功能分子成像系统——采用近红外激光光源,激光光源更容易达到染料的吸收峰、窄光谱激光减少光泄漏的产生、在更短的时间内产生更高的信噪比,背景更低。

多功能分子成像系统除了能完成双激光近红外检测,还可完成RGB三色荧光凝胶成像检测,高灵敏化学发光检测,彩色图片成像,普通凝胶检测、植物组织和动物组织成像等。



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