有关融合蛋白表达载体的克隆

在构建融含蛋白表达载体时除了要注意插入片段的方向、读码框架与载体保持一致外，注意以下问题可能会减少一些不必要的麻烦，当外源片的插入载体起始密码的后面，另一个基因的前面时，注意检查插入后基因的两端是否引入了新的终止密码，特别是用到Klenow mung bean 核酸酶，T4 Polymerase 补齐，去粘末端等技术调整读码框时或不同酶切位点粘端连接时要注意。如XbaI识别序列隐含终止密码，调整码框时就要注意，又如BamH I酶切粘端为GATCC ＿补平后如果接到T 后面就有可能形成TGATCC这种隐含终止密码的情况。（还有外源基因本身不可带终止密码）另外要注意启动子后面避免出现几个靠近的不同框架的ATG ，以减少对表达的影响。如果插入片段插到载体终止密码前和另一个基因后面，则只用注意插入片段前方是否有终止密码即可。