靶细胞杀伤实验:MTT和CCK8比较

2020年9月14日 16:17:11 来源: 互联网
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Cell Counting Kit-8简称CCK-8试剂盒,是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。
 
WST-8是一种类似于MTT的化合物,在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。对于同样的细胞,颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。
 
WST-8是MTT的一种升级替代产品,和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点。首先,MTT被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的formazan不是水溶性的,需要有特定的溶解液来溶解;而WST-8和XTT、MTS产生的formazan都是水溶性的,可以省去后续的溶解步骤。其次,WST-8产生的formazan比XTT和MTS产生的formazan更易溶解。再次,WST-8比XTT和MTS更稳定, 使实验结果更加稳定。另外,WST-8和MTT、XTT等相比,线性范围更宽,灵敏度更高。

 
该方法已被广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞增殖试验、细胞毒性试验以及药敏试验等。
 
总之,CCK-8的原理跟MTT其实是相同的,不同之处在于CCK-8法生成的formazan是水溶性的,不需要再吸出培养液加入有机溶剂溶解这个步骤,因此可以减少一定的误差。其他优点就是重复性优于MTT;对细胞毒性小;为1瓶溶液,毋需预制,即开即用。
 
但是CCK-8比MTT的价格要贵不少,所以一般来说,还是MTT法用的多。
 
MTT和CCK-8(上海同仁)的原理基本是一致的,但也存在如下的区别:
 
1、常规操作的MTT法受药物本身的颜色、培养基的颜色、血清的浓度使结果的变异较大。如采用潘兴瑜的MTT改进法将有效的降低试验的飘变率,本人硕士期间就采用潘的MTT改进法,试验重复一两次就的到理想的结果!受益非浅!
 
2、CCK-8是最近新出现的方法,它操作简便、结果变异率小。对悬浮细胞的测定有它独到的地方!CCK-8为黄色的,要采用无酚红的培养基进行测量!
 
本人博士期间采用的CCK-8法,自我认为两种方法各有千秋,有时不可能互相替代。当你测量药物的药效时,如果药物本身有颜色,那么采用潘的MTT 改进法可以通过离心去除颜色的干扰!多次的离心和吸取上清要求操作者要小心和仔细,否则有降低试验的准确率,而这却是CCK-8法的长处所在。


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