深圳先进院微小RNA调控T细胞凋亡研究获进展
近日，Nature Publishing Group (NPG)下的国际学术期刊Cell Death & Disease 发表了中国科学院深圳先进技术研究院医药所抗体药物中心阮庆国研究小组的最新成果：微小RNA-21通过靶向抑癌基因Tipe2来调控T细胞凋亡。
微小RNA(MicroRNAs, miRNA)是一类短链非编码RNA(约22个核苷酸)，可以与mRNA中与其配对的互补序列结合，使mRNA发生降解或抑制蛋白翻译，从而导致由mRNA编码的蛋白质减少。MiR-21是miRNA中的一员，在乳腺癌、肺癌、结肠癌、胃癌和胰腺癌等多种实体肿瘤中明显过量表达，在多种细胞类型中起抗凋亡作用。最近的研究表明，miR-21可以抑制鼠和人类原代T细胞的凋亡并调节细胞因子的合成，然而其分子机制仍不清楚。
为了探讨NF-κB和miR-21抑制细胞凋亡的分子机制，阮庆国研究小组对缺失Tipe2(亦称肿瘤坏死因子-α诱导蛋白8-类似蛋白2(TNFAIP8L2))的T 淋巴细胞的凋亡进行了分析，发现Tipe2作为一种“分子桥”把miR-21与细胞凋亡联系起来，miR-21(至少部分)通过直接靶向肿瘤抑制基因Tipe2从而抑制T淋巴细胞的细胞凋亡。该研究结果揭示了NF-κB、miR-21和Tipe2三个因子调控T细胞凋亡的特异性通路，这将为开发调控细胞凋亡的新途径提供理论依据。
该研究获得深圳市新一代单抗药物孔雀团队和深圳市科创委基础研究等项目资助。
图1 NF-kB通过miR-21–Tipe2轴抑制活化诱导的T细胞凋亡。TCR和抗CD28抗体通过IKK刺激NF-kB的活化(通过降解抑制蛋白IkB)。活化后NF-kB转移到细胞核内并启动目标基因，包括miR-21。MiR-21通过降解Tipe2从而抑制活化诱导的T细胞凋亡。
图2 MiR-21通过编码区依赖的方式靶向Tipe2。 (A) 荧光素报告实验确认miR-21的假定结合位点。(B)小鼠Tipe2编码区中预测的miR-21结合位点及其突变策略。“X”表示突变位点。 (C) 荧光素报告实验分析WT和miR-21结合位点突变的Tipe2编码区。“X”表示突变位点。*P<0.02。以上数据代表三次独立实验。
图3 miR-21通过Tipe2调控T细胞凋亡。(A)从WT和Tipe2 -/- 小鼠(n=3)分离脾初始CD4+T 细胞并分别用板结合的抗CD3抗体 (1mg/ml)和可溶性抗CD28抗体(1mg/ml)处理或不处理。细胞用annexin V 和7AAD染色，通过流式细胞术分析细胞凋亡的程度。 (B) 用miR-21相似物或阴性对照与Tipe2过表达的载体或空载体共转染EL4细胞。24h以后，分别用板结合的抗CD3抗体 (1mg/ml)和可溶性抗CD28抗体(1mg/ml)处理或不处理，细胞用annexin V 和7AAD染色，通过流式细胞术分析细胞凋亡的程度。*P<0.01。以上数据代表三次独立实验。
