凝胶色谱中对固定相的要求

凝胶色谱中对固定相的要求

胶色谱常用的凝胶是葡聚糖凝胶。葡聚糖凝胶常被分为亲水性葡聚糖凝胶、亲脂性葡聚糖凝胶和葡聚糖凝胶离子交换剂三大类。

亲水性葡聚糖凝胶是由一定分子量的葡聚糖(右旋糖酐，dextran)悬浮于有机相中，加入交联剂表氯醇使葡聚糖交联聚合而成，其商品名为Sepha—dex。加入交联剂量不同可制成不同交联度的凝胶，因此其应用范围也有所不同。不同交联度商品凝胶的吸水程度及应用范围等情况见表2-3。

制备凝胶薄层时与一般薄层有所不同，首先用于薄层色谱的凝胶颗粒要细(小于40um)，交联度要低(G-50以下)。因交联度大的凝胶不易制板。此外，在制备凝胶薄层时还应注意以下几点。①凝胶预先必须用水或缓冲液浸泡，使之充分膨胀后，经放置沉降，再倾去上层浸泡液即可铺制薄层，不需黏合剂，但玻璃板必须洁净，否则铺不好。②铺好的湿薄层需置于特制的展开槽中，薄层的上、下两端连上厚滤纸条，以下行法(薄层与水平约成20°角)从薄层上端将展开剂引到薄层上，使薄层饱和或达到平衡(约需12h)，然后洗脱液由薄层下端流人储液槽内。③薄层达到平衡后，需通过展开槽盖上的小孔点样品溶液。④由于凝胶薄层一直为潮湿状态，所以展开剂的前缘不容易察见。⑤展开速度很慢，一般不超过4cm/h。

葡聚糖凝胶只能用于水溶性物质，但在葡聚糖分子上引入有机基团，则可使之成为亲脂性葡聚糖凝胶。如在G-25凝胶上引入羟丙基基团，与糖分子以醚键相连，使之成为既有亲水性又有亲脂性的LH-20葡聚糖凝胶，适用于有机物，如黄酮、蒽醌、色素等成分的分离。

葡聚糖凝胶离子交换剂在G-25或G-50葡聚糖凝胶上引入羧甲基、磺乙基、磺丙基(SP，一C3H7SO3H)、二乙基氨乙基及季铵乙基等制成的既具有凝胶的优点又具离子交换性质的载体，在生化及天然化合物方面得到广泛应用。这些离子交换剂在水、盐溶液、弱碱溶液、弱酸溶液及有机溶液中较稳定，但在强酸溶液中易水解，所以应避免在pH值小于2的溶液中操作。