免疫传感器技术
实验概要
本实验以非标记光学免疫传感器为例，简述免疫传感器的检测步骤。该免疫传感器是用硅片来作为抗原或抗体的固相载体，将抗原或抗体包被于其上之后，在硅片上覆盖以一栅栏状遮蔽，再用短波紫外线照射，使硅片上产生有免疫活性和无免疫活性的抗原(抗体)的周期区，当将此表面与检样共育时，只在免疫活性区产生抗原抗体反应，通过检测光的衍射信号强度，获得待测物的浓度。
实验原理
免疫传感器是应用固定有抗原或抗体的电极制造的一类生物传感器(biosensor)。创建于20世纪70年代，该免疫传感器巧妙地利用抗体与相应抗原间具有特异性识别和结合能力的原理设计而成。该传感器有两种，一是非标记光学免疫传感器，即直接用化学修饰法将抗原或抗体固定于金属电极表面，当电极上的固定化抗原与待测抗体相遇时，即于电极表面发生抗原抗体反应，因为抗体是带电荷的蛋白质，故能引起固定化抗原膜的电荷状态发生改变，并产生感应膜电位差，通过对膜电位差的测定，即可测算出标本的抗体量。二是标记免疫传感器，是在待测样品中引入过氧化物酶标记的抗原，标记抗原与未标记待测抗原竞争结合传感器探头上的抗体，洗去未结合的游离抗原后，将探头浸入酶底物中，即可测算标本中的抗原。
实验步骤
1. 活化硅片，将硅片于含有20g/L APTS(aminopropyl triethoxysilane)的丙酮溶液中回流16h，用丙酮和去离子水彻底清洗；
2. 抗体包被可直接用物理吸附法将抗体包被于活化硅片上，也可将抗体先用100mmol/L过碘酸钠处理，再与APTS活化的硅片于4℃共育过夜进行包被；
3. 栅化表面，将包被抗体的硅片用一装有254nm紫外光灯的蔽光柜(Model MA 40 Mask Aligner)覆盖后，用紫外光照射150~200 s；
4. 制备检测探头(dipstick)，将上述处理过的硅片切成4×5mm小方片，固定于一塑料检测探头上一个凹进去的腔内；
5. 检测样品，将50μl检样滴加于探头的硅片上，室温反应10min，用去离子水洗后吹干，用光学生物传感器读出器测定光衍射信号，推算出待测物的浓度。根据检测光的衍射信号值，获得待测物的浓度，其灵敏度比常规检测方法要高。
