高效液相色谱法检测保健食品中肉碱的含量

1范围

建立了高效液相色谱法测定保健食品中肉碱含量的方法。

本法适用于以肉碱为主要原料的保健食品中肉碱的测定。

2原理

用0.5mmol/l盐酸溶液超声提取样品中的肉碱，用反相高效液相色谱法分离。标准样品的保留时间是定性的，外部标准方法是定量的。

3试剂和材料

注：除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

3.1 试剂

3.1.1 磷酸氢二钾（K2HPO4）。

3.1.2辛烷磺酸钠(C8H19NaO3S)。

3.1.3 盐酸（HCl）。

3.1.4磷酸（H3PO4）。

3.1.5硅藻土（SiO2）：化学纯。

3.1.6乙腈(C2H3N)：色谱纯度。

3.2 试剂配制

3.2.1盐酸溶液（0.50 mmol/L）：吸收4.2 ml盐酸，用水稀释，体积为100 ml。然后取1mL上述溶液，用水稀释，定容至1L·L~(-1)。

3.2.2缓冲液：分别称取磷酸氢二钾8.7g，辛烷磺酸钠0.4325g，溶于水，稀释至1L，用磷酸调节至pH 2.5。

3.3 标准品

肉碱（C7H15NO3）：纯度≥98%或经国家认证认可的标准物质..

3.4 标准溶液配制

3.4.1肉碱标准储备液（1.0 mg/ml）：肉碱标准品25 mg（精确至0.1 mg）精密称取25 ml容量瓶中，溶于盐酸溶液中，定容至刻度，摇匀。

3.4.2肉碱标准工作液：标准肉碱标准保留液在5 mL瓶中，用盐酸稀释至规模化，经0.50 mL、1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL准确吸收，得到0.10 mg/mL、0.20 mg/mL、0.40 mg/mL、0.60 mg/mL、0.80 mg/mL、1.0mg/mL的标准工作液。

4仪器

4.1高效液相色谱法：配备紫外检测器或二极管阵列检测器。

4.2平衡：灵敏度为0.1mg和0.01mg

4.3 超声波提取器。

5分析步骤

5.1 试样制备

5.1.1 试样处理

5.1.1.1 固体试样

样品粉碎混合均匀称取0.1g~2g（精确至0.001g）（含待测组分约5mg~50mg）。将盐酸溶液加入50ml容量瓶中，超声提取10min，冷却，用盐酸溶液稀释至刻度，混匀，过滤，计数一次滤液毫升数，收集滤液，经0.45um水相膜过滤，取连续滤液进行检测。

5.1.1.2 软胶囊试样

样品被切开、挤压和混合，重量为0.1g≤2g(精确到0.001g)，加入相同量的硅藻土，进行均匀分散研究，并说其中一部分(精确到0.001g，约5 mg~50 mg)，被测组分用塞状三角瓶转移到250 ml，吸收盐酸溶液50 ml，加入三角瓶，称重，填充超声萃取10 min，冷却，与盐酸溶液混合，在毫升中丢弃初始滤液，收集滤液，经过0.45μm的水相滤膜，取滤液进行测量。

5.1.1.3 液体试样

精密测量：1毫升～5毫升（含约5毫克～50毫克的待测组分），35毫升盐酸溶液加入50毫升容量瓶，超声提取10分钟，冷却，用盐酸溶液稀释，混合，过滤，丢弃一级滤液毫升，收集滤液，通过0.45微米水相滤膜，取连续滤液进行测定。

5.1.2 稀释

根据样品中肉碱的含量，将溶液中的肉碱稀释至0.10mg/mL~1.0mg/mL。用盐酸溶液。

5.2 色谱参考条件

5.2.1柱：C18柱：4.6*250 mm，5微米或同性能柱。

5.2.2流动相：缓冲溶液90 10。

5.2.3流量：0.8ml/min。

5.2.4 检测波长：210nm。

5.2.5 进样量：20μL。

5.3 标准曲线的制作

将肉碱标准工作液(3.4.2)分别从低浓度到高浓度注入高效液相色谱(HPLC)中，并测定相应的峰面积。以标准工作液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线

5.4待测溶液的测定

在相同的色谱条件下，将待测液（5.1.1.1，5.1.1.2，5.1.1.3，5.2.1）注入高效液相色谱法按保留时间定性测定峰面积，按标准曲线计算待测溶液中肉碱的浓度

6 分析结果的表述

试样中肉碱含量按式（1）计算：

式中：

X—固体样品中肉碱含量为g/100g，液体样品中肉碱含量为g/100ml。

根据每毫升毫克标准曲线(毫克/毫升)计算待测溶液中肉碱的浓度。

V—试样的稀释体积，单位为毫升（ml）；

M/L-取样质量，以克(G)为单位；抽样量，以毫升(毫升)为单位；

F——稀释倍数；

100——单位转换；

1000——单位转换。