一、概要

　　莱克多巴胺(Ractopamine,RAC)是一种苯乙醇胺类β2-肾上腺素受体激动剂，具有广泛的生理效应，临床上主要用于治疗支气管哮喘，冲血性心力衰竭症和肌肉萎缩症等。当其用量高于临床用量的5～10倍时，能调节体内代谢，增加脂肪分解，促进蛋白合成，表现出营养再分配效应。添加于饲料中，极大的提高了家畜的瘦肉率。当人食用含有莱克多巴胺的动物组织后，极易产生心跳加快、震颤、心悸等中毒反应，更严重的会导致人体致畸致癌。 莱克多巴胺检测试剂盒是应用ELISA技术研发而成的检测产品，能最大限度地减少操作误差和工作强度。

　　二、试验原理

　　莱克多巴胺检测试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被莱克多巴胺抗原，样本残留的莱克多巴胺和微孔条上预包被的抗原共同竞争抗莱克多巴胺抗体，加入酶标二抗后，加入TMB底物显色，样本吸光度值与其残留物莱克多巴胺呈负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中莱克多巴胺的含量。

　　三、适用范围:

　　莱克多巴胺检测试剂盒可定性、定量检测动物组织、饲料、尿液等样本中莱克多巴胺的残留量。

　　四、交叉反应率

　　莱克多巴胺 ……………………………………… 100%

　　多巴酚丁胺 …………………………………………小于1%

　　盐酸多巴胺?…………………………………………小于1%

　　克仑特罗 ………………………………………小于1%

　　沙丁胺醇 …………………………………………小于1%

　　五、提供的材料与试剂

　　酶标板、标准品×5瓶*、莱克多巴胺高浓度标准品100ppb、莱克多巴胺抗试剂、莱克多巴胺酶标物、底物液A液、底物液B液、终止液、浓缩洗涤液(10×) 莱克多巴胺浓缩样品稀释液(2×)

　　六、操作步骤：

　　1、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20～25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。

　　2、取出需要数量的微孔板，将不用的微孔放入自封袋，保存于2～8℃。

　　3、洗涤工作液在使用前也需回温。

　　4、编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。

　　5 加标准品/样本：加标准品/样本50l/孔到对应的微孔中，然后加入莱克多巴胺抗试剂50l/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应30min。

　　6、洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液250l/孔，充分洗涤4~5次，每次间隔10s，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）。

　　7、加酶标物：加入莱克多巴胺酶标物100l/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应30min，取出重复洗板步骤6。

　　8、显色：加入底物液A液50l/孔，再加底物液B液50l/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应15～20min。

　　9、测定：加入终止液50l/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测，请在5min内读完数据），测定每孔OD值。(若无酶标仪，则不加终止液用目测法可进行判定)。

　　七、方法灵敏度、准确度、精密度

　　试剂盒灵敏度：0.1ppb

　　样本最低检测限：

　　动物组织…………………………………0.1ppb

　　饲料样本……………………………………5ppb

　　尿液样本……………………………………0.1ppb

　　回收率：

　　动物组织………………………………………80±10%

　　饲料样本………………………………………80±10%

　　尿液样本………………………………………80±10%

　　精密度：试剂盒的变异系数均小于10%

　　八、注意事项

　　1、室温低于20℃或试剂及样本没有回到室温（20～25℃）会导致所有标准的OD值偏低。

　　2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。

　　3、每加一种试剂前需将其摇匀。

　　4、反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。

　　5、不要使用过了有效日期的试剂盒；不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂，掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低；不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。

　　6、储存条件

　　保存试剂盒于2～8℃，不要冷冻，将不用的酶标板微孔板放进自封袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。

　　7、试剂变质的迹象

　　发色试剂有任何颜色表明发色剂变质，应当弃之。0标准的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）时，表示试剂可能变质。

　　8、在加入底物液A液和底物液B液后，一般显色时间为15～20min即可。若颜色较浅，可延长反应时间到30min。反之，则减短反应时间。

　　9、该试剂盒最佳反应温度为25℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。

　　九、贮藏条件及保存期

　　贮藏条件：保存试剂盒于2~8℃。

　　保存期：该产品有效期为12个月。