一、用途

　　沙门氏菌乳胶凝集检测试剂用于确证鉴定选择性平板上分离出的可疑菌落。该试剂盒仅供专业人员使用。

　　二、原理

　　乳胶颗粒表面包被与沙门氏菌特异性抗原具有特异性的多价抗血清。与沙门氏菌菌悬液混合后，乳胶颗粒可迅速凝集。HKM®沙门氏菌乳胶凝集试剂盒可检测99%以上的有动力的沙门氏菌和特定的无动力沙门氏菌。

　　三、试剂盒组成成分

　　REAG TEST 测试试剂

　　HM42a 沙门氏菌乳胶试剂

　　2.5mL

　　乳胶颗粒包被沙门氏菌抗原相应的兔抗血清。含0.099%的叠氮化钠防腐剂。（蓝色瓶盖）

　　CONTROL + 阳性对照试剂

　　HM42b

　　阳性对照

　　0.5mL

　　无活性的沙门氏菌抗原，含0.099%的叠氮化钠防腐剂。（黑色瓶盖）

　　NaCl 0.85% 0.85%盐水

　　HM40

　　0.85%生理盐水

　　5.0mL

　　含0.099%的叠氮化钠防腐剂。（白色瓶盖）

　　使用说明书

　　检测板

　　搅拌棒

　　需要的其它材料

　　l 接种环

　　l 移液器

　　四、警告和注意事项

　　安全：

　　1、试剂仅供体外诊断使用。

　　2、试剂盒作防腐剂使用的叠氮化钠可与铅或铜制品反应形成易爆的金属叠氮化物。可用大量水冲洗以避免叠氮化物的堆积。

　　3、在处理或检测可疑致病菌时应采取适当的预防措施。被污染的物品可用3%的次氯酸钠消毒处理30分钟。含酸的废液应作中和处理。

　　4、阳性对照液在生产中已作惰性处理，但在使用中依然应小心处理。

　　检测过程：

　　1、试剂盒应按说明书使用。

　　2、所有试剂在使用前应达到室温。

　　3、不要稀释试剂盒内的任何试剂

　　4、不要混合不同批次试剂盒的试剂。

　　5、不要冷冻试剂盒内的试剂。

　　6、不要使检测乳胶试剂的滴管接触到阳性对照试剂或细菌样品。

　　7、注意凝集状态，呈凝乳状或纤维状可能为非真实凝集。

　　8、使用前应确保检测板清洁干燥。

　　五、贮存及保质期

　　检测试剂盒不使用时应贮存在2～8℃，并应在包装盒标签上的有效期内使用检测试剂。

　　六、样本

　　可检测选择性分离平板上的沙门氏菌可疑菌落。

　　七、检测过程

　　质量控制：

　　在每次使用检测试剂盒前应作下列质量控制检测，以确证试剂的有效性。

　　1、检测试剂的控制：滴1滴测试试剂(HM42a)和1滴生理盐水(HM40)于同一个测试反应环内，用搅拌棒在整个区域内混匀液体，轻摇检测板2分钟并观察是否会出现凝集。如果出现凝集反应，表明检测试剂或生理盐水受到污染，应废弃处理。

　　2、阳性对照的控制：滴1滴阳性对照试剂(HM42a)和1滴测试试剂(HM42a)于同一个测试反应环内，不要使检测乳胶试剂的滴管接触到阳性对照试剂。用搅拌棒在整个区域内混匀液体，轻摇检测板2分钟，应观察到凝集反应。如果未出现凝集反应，应采用新鲜的检测试剂盒。

　　测试程序：

　　1、滴1滴生理盐水(HM40)于检测板的一个反应环内。

　　2、用接种环从选择性分离平板上挑取可疑菌落，与反应环内的生理盐水混合，形成均匀的混浊的菌悬液。

　　3、轻摇检测板2分钟，观察是否会出现自动凝集现象。如果菌悬液保持均匀状态，继续第4步。

　　4、摇匀乳胶测试试剂后，滴1滴于已滴加菌悬液的反应环内，不要使检测乳胶试剂的滴管接触到菌悬液。

　　5、用1支干净的搅拌棒混匀菌悬液和测试试剂，轻摇检测板2到3次，在2分钟内观察凝集结果。

　　6、记录结果后，将搅拌棒和检测板进行适当的消毒处理。

　　八、结果说明

　　在2分钟内出现凝集，表明样品中有沙门氏菌，如不出现凝集，表明测试菌落中无沙门氏菌。

　　九、使用的局限性

　　1、结果应依据所有的临床或实验室信息进行判断。

　　2、沙门氏菌的粗糙菌株可在生理盐水中形成非特异性自动凝集，因此不可用乳胶试剂盒检测。

　　3、不能检测部分无动力沙门氏菌。

　　4、有些氧化酶阳性菌株可能引起假阳性凝集结果。

　　5、保存较长时间的肠杆菌科的营养琼脂斜面培养物可引起非特异性凝集，而保存时间过长的沙门氏菌可能出现假阴性结果。因此检测菌株应为新鲜培养物。

　　6、乳胶凝集检测为初步鉴定结果，所有的阳性结果的纯培养物应作进一步的鉴定分析和血清分型。

　　十、检测效果对比

　　HKM® 沙门氏菌乳胶试剂盒与一种已广泛使用的商业化的乳胶试剂盒检测效果对比，用二种产品检测126株沙门氏菌和58株潜在交叉反应的菌株。

　　HKM®

　　总计

　　阳性

　　阴性

　　另一已广泛使用的乳胶试剂盒

　　阳性

　　135＊＊

　　1＊

　　136

　　阴性

　　0

　　48＊＊＊

　　48

　　总计

　　135

　　49

　　灵敏度

　　135/136＝99.3%

　　特异性

　　48/48＝100%

　　一致性

　　183/184＝99.5%

　　1＊一个样品在HKM®检测试剂中呈阴性结果，在对比检测试剂中呈可凝结果。样品最终鉴定为bergen沙门氏菌

　　＊＊135株分离菌株中，11株在2种试剂盒均存在交叉反应。它们分别为：差异柠檬酸杆菌1株、鲍氏不动杆菌2株、斯氏普罗威登氏菌1株、蜡样芽孢杆菌2株、金黄色葡萄球菌4株、链球菌1株。以上所有交叉反应的菌株中，均不会在沙门氏菌选择性分离平板上生长或生长时菌落呈现非典型的沙门氏菌菌落形态。蜡样芽孢杆菌凝集时为非典型凝集，（呈纤维状。）

　　＊＊＊1株都伯林沙门氏菌在二种试剂盒均重复性的出现阴性结果。

　　十一、重复性

　　批内重复性：通过以系列稀释度的参照抗原和试剂盒对照抗原及一组34个细菌样品盘对同1批产品的灵敏度和特异性进行检测。由不同的操作者随机测试3次，最终效价由参照/对照抗原测定，并且3次定性分析结果完全一致。

　　批间的重复性：通过以系列稀释度的参照抗原和试剂盒对照抗原及一组34个细菌样品对3批产品的灵敏度和特异性进行检测。3个批次间，最终效价无显著差异及定性分析结果为100%一致性。