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高通量筛选有哪些种类?

2021.6.11

该技术使用较低剂量,在短时间内完成对大量化合物的生物活性筛选,由于具有微量化,快速,高效等特点,被国内外多数医药研究机构广泛采用。国外许多大型农药公司亦将这种技术用于新农药的筛选。高通量筛选和组合化学(combinatorialchemistry)、自动化操作系统等技术的有机结合,可以缩短新农药创制的研发周期,降低研发成本,提高开发的成功率。基本筛选法的种类如下:

(1)活体筛选。只对个体较小、对药剂敏感而且容易培养和操作的供试昆虫,如鳞翅目低龄幼虫、孑孓、水蚤较为适用。一般步骤是将一定量的待测药液和昆虫人工饲料或营养液分别加入微量滴定板的孔中,混匀。然后将单头供试昆虫或者卵置于每一孔内,用透明盖封好,放置在温度、湿度、光照等适宜的控制条件下培养一定时间,后检查结果,观察记录供试昆虫的生命指标。如生存或死亡、生长取食情况等,推测判断供试药剂的生物活性。

(2)离体筛选:

①受体结合试验:该法适用筛选对供试昆虫神经受体有抑制活性的化合物。一般步骤是首先通过一定方法分离提取一定量的昆虫神经受体(如乙酰胆碱受体),然后将放射性标记的相对应的神经毒素,如[3H]环蛇毒素(一种烟酸乙酰胆碱受体抑制剂)和[3H]奎宁环基乙二酮(蕈毒碱乙酰胆碱受体抑制剂)等,和神经受体及待测的化合物分别加入微量滴定板孔中,混合均匀,于控制条件下培养一定时间后,将板上混合物转移到玻璃—纤维素膜上,并用细胞收集器洗涤,通过放射性同位素检测仪记数纤维素膜上的放射性,如果放射性减少或消失,说明化合物与这些神经受体抑制剂有较强的竞争作用,判断出有活性。

②靶标酶活性测定:用于筛选对昆虫靶标酶有活性的化合物首先分离提取昆虫体内的重要靶标酶(如乙酰胆碱酯酶,Na+-K+-ATP酶等)在微量滴定板上分别加入一定量酶液、待测化合物与酶反应的底物及其他所需成分,混合均匀,在适宜条件下反应一定时间,通过分光光度计测定吸光度值,求出酶活性大小,在化合物作用下,如果酶活性降低,说明供试化合物与酶发生结合,有一定的活性。


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