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含甲酰胺的聚丙烯酰胺凝胶的制备实验

2020.8.10

试剂、试剂盒 本方法包括方案 8 中所有物品加上: 甲酰胺(100%)


实验步骤


材料


本方法包括方案 8 中所有物品,加上:


甲酰胺(100%)


方法


1. 依方案 8 步骤 1~8 淸洗并安装玻璃板制成胶模。


2. 在实验桌的工作区上铺上衬塑料的保护纸。


灌制测序凝胶时几乎不可避免将丙烯酰胺溶液滴于桌面,可准备一个大托盘对其进行收集。


3. 在一个 250 ml 有臂锥形瓶中配制适当浓度的丙烯酰胺溶液(表 12-20)。这些溶液足够配制一块 40 cmx40 cm 的测序凝胶。


重要:凝胶的配制必须一气呵成,中碱间不能断断续续。


4. 混合所有试剂,在 55°C 水浴中加热 3 min 帮助尿素溶解。


溶解尿素的过程十分缓慢,必须依靠外部加热。


5. 从水浴中取出溶液,冷却 15 min 至室温。不断搅拌混合物。加水到 100 ml。


6. 把烧瓶放在真空装置里抽去气体。


防止聚合时产生气泡,该过程会产生热量。


7. 把溶液放入 150 ml 玻璃烧杯中。加 3.3 ml 新制的 1.6% 的过硫酸铵,轻轻搅动溶液使试剂混匀。


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