亲和色谱法配基与载体的结合
配基要结合到载体上,首先要活化载体上的功能基团,再将配基连接到活化基团上。此偶联反应必须在温和条件下进行,不致使配基和载体遭到破坏;且偶联后要反复洗涤载体,以除去残存的未偶联的配基,还要测定偶联的配基的量。
最常用的载体是琼脂糖4B(Sepharose4B)。把琼脂糖与溴化氰在pH值为11条件下进行处理,能使琼脂糖活化。此时,溴化氰与琼脂糖的羟基反应生成氨基甲酸酯基团。若有邻位羟基存在,则形成亚氨碳酸基团。经取代后的载体最后用有机合成法和配基结合,这种配基必须含有一种适合反应的基团,通常是氨基或羟基。
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