液相色谱柱的选择、使用、保护和常见故障的扫除
液相色谱柱的选择、应用、保护和故障排除一般分为正柱和反相柱。
正相柱多为硅胶柱，或硅胶表面带有CN，-NH3等官能团的键合硅胶柱。反相柱主要以硅胶为填料，非极性十八烷基官能团(ODS)为C18柱。其他常用的逆柱是C8、C4、C2和苯基柱。还有离子交换柱、GPC柱、聚合物填充柱等。本文介绍了反相色谱柱的选择和应用.
一、反相色谱柱的挑选
1.柱子的PH值运用规模 反相柱长处是固定相安稳，运用广泛，可运用多种溶剂。但硅胶为基质的填料，运用时必定要留意活动相的PH规模。通常情况下，C18柱的pH值为2~8，活性相的pH值小于2，这将导致键合相的水解；当pH值大于7时，硅胶容易溶解；缓冲固定相常用于降解。一旦发生这种情况，列总数就会下降。同一填料不同等级的色谱柱是不同的。如果活性相PH值较高或经常使用缓冲液，则建议选择较大PH值的色谱柱，如Diane的赞许柱PH 2 9或Zorbax PH 2 11。 5的柱子。
2.填料的端基封尾（或称封口）
采用封口技术，利用填料中残留的硅羟基封接端基，可改善极性化合物的吸附或尾矿，增加碳含量，不易贮存，填料稳定性好，组分保存时间好。如果要分析的样品是酸性或碱性化合物，好使用端到端密封的填料塔。
二、液相色谱柱的运用
在使用色谱柱之前，好对色谱柱的功能进行测试，并将测试结果保存下来，作为今后评估色谱柱功能变化的参考。柱函数测试应根据色谱柱工厂报告中的条件(工厂试验中使用的条件为佳条件)进行，只要测量结果具有可比性。然而，应该注意的是，柱的功能可能会因样品、活性相、柱温度和其他使用条件的不同而有所不同。
1、样品的前处理
好运用活动相溶解样品。
预处理柱用于去除样品中的强极性或柱填料的不可逆吸附。
采用0.45μm滤膜去除颗粒杂质。
2、活动相的制造
液相色谱是指样品组分在柱填料和活性相之间进行质量交换以达到分离的目的，因此活性相必须具有以下特性：
答：活性样品相对于样品具有一定的溶解性，这可以确保样品成分不会被存放在柱中(或在柱中保存很长时间)。
活性相和样品不发生化学反应。
为了获得良好的分离效果，活性相的粘度应尽可能小；降低塔的压降，延长泵的使用寿命(可采用递升温法降低活性相的粘度)。
活性相的物理化学性质应与所使用的检测器相适应。优选地使用低紫外吸收的溶剂来使用紫外检测器。
即活化相的沸点不能太低，否则容易产生气泡，不能进行试验。
在生产活动阶段后，必须对其进行脱气处理。去除活性相中溶解的微量气体不仅有利于检测，而且可以防止微量氧对样品的活性相的影响。
3。运动相速度的选择是柱内运动相线速度的函数，采用不同的流速可以得到不同的柱效应。对于特定的液相柱，为了找到的柱效，好采用佳的流速。对于内径为4.6mm的液相色谱柱，流速为1ml/min，内径为4.0mm时，流速为0.8mL/min。 当选用流速时，剖析时刻或许延伸。改变流动相洗涤强度的方法可以缩短分析时间(例如，在使用反相柱时，可以适当增加甲醇或乙腈的含量)。
试验前，活性水相的制备效果好，特别是在夏季使用缓冲溶液作为活性相时。添加叠氮化钠以防止细菌生长是好的。
流动相要求使用0.45μm的滤膜来去除颗粒杂质。
运用HPLC级溶剂制造活动相，运用适宜的活动相可延伸液相色谱柱的运用寿数，进步柱功能。
三. 液相色谱柱的保护
1. 液相色谱柱的平衡
反相液相色谱柱在乙腈/水中保存，经工厂检验。柱应用甲醇或乙腈柱体积的10-20倍洗涤。请确保在样品分析中使用的流动相和乙腈/水是相容的。每天有足够的时间来平衡液相柱和流动相，您将在处理问题时获得大的“补偿”，您的液相柱的使用寿命将变得更长！业务步骤：
使用流动相平衡液相色谱柱，流速在平衡开始时缓慢增加，直到达到稳定的基线(如果缓冲盐或离子对试剂的流速较低，则需要较长的时间来平衡)。
如果活性相含有缓冲盐，则应注意纯水的“过渡”，即需要用纯水冲刷30分钟以上才能开始日常分析。分析后，需要用纯水清洗柱30分钟，除去盐缓冲液，然后用甲醇冲洗柱30分钟。
2. 液相色谱柱的再生
对于长期液相色谱柱，柱效率往往降低(理论塔板数减少)。液相色谱柱可以再生，在有条件的实验室中，应该使用廉价的泵来再生色谱柱。
建议用来冲刷柱子的溶剂体积
液相色谱柱的大小。柱体积中所用溶剂的体积。
125-4mm 1.6ml 30ml
250-4 mm 3.2ml 60ml
250-10mm 20ml 400ml
挑选再生办法：
极性固定相（如Si，NH2* ，DIOL基色谱填料）的再生： 正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水**
非极性固定相(如反相色谱填料RP-18、RP-8、CN等)的再生：水/乙腈/氯仿(或异丙醇)/乙腈/水
当NH2改性的液相色谱柱再生时，由于NH2可能以铵离子的形式存在，洗涤后应先用0.1M氨洗，再用水洗，直至碱液完全排出。
0.05M稀硫酸可用于净化被污染的液相色谱柱。如果有机溶剂/水的简单处理不能完全去除吸附在硅胶表面的杂质，则洗涤后用0.05m的稀硫酸进行洗涤是非常有效的。
3. 液相色谱柱的保护
用柱前保护分析柱(硅胶在极性活性相/离子活性相中有一定的溶解度)
大多数反相液相色谱柱的pH稳定尺度为2~7.5，尽量不超过液相色谱柱的pH尺度。
防止活动相组成及极性的剧烈改变
活动相运用前有必要经脱气和过滤处理
如果使用极性或离子缓冲溶液作为活性相，则在测试结束时，色谱柱应清洗干净，并储存在甲醇或乙腈中。
氯化物的溶剂对它有一定的腐蚀性。因此，需要注意的是，为了防止腐蚀，柱和连接管在很长一段时间内不能保持这样的溶剂。
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