病毒性心肌炎患者血浆外泌体生物标志物研究进展
病毒性心肌炎（viral myocarditis，VMC）是由多种病毒感染引起心肌炎症病变，该疾病临床确诊比较困难，到目前为止，心内膜活检仍然是VMC确诊的金标准，由于心肌活检难度大，并且存在创伤风险，导致其在临床上不能广泛开展。有研究报道，血液外泌体可能在柯萨奇B病毒引起的VMC发病的病理生理机制中扮演重要角色。通过比较心血管疾病患者血浆外泌体差异蛋白质组，有可能筛选出隐藏的生物学信息，这将为寻找敏感特异的生物标志物及新的药物靶点提供新的思路。
河南省人民医院心内科赵宗磊等分别收集河南省人民医院（2016年1月至2017年12月）Control组健康人及VMC组患者血浆标本各50份，按照随机数字表法选取Control组（n=5）与VMC组（n=5）空腹血浆标本各1 ml，分别利用超速离心法提取血浆外泌体后，采用差异凝胶双向电泳（DIGE）技术进行蛋白质分离，经差异分析软件处理后，采集VMC组和Control组之间差异>2倍的蛋白质点，通过应用基质辅助激光解吸电离-飞行时间/飞行时间质谱（MALDI-TOF/TOF MS）对差异蛋白点进行鉴定。各组随机采取40份血浆外泌体标本，采用VMC特异性差异蛋白进行酶联免疫吸附实验（ELISA）验证。分析健康对照组（Control组）与病毒性心肌炎组（VMC组）血浆外泌体中的差异蛋白质组，筛选可能与VMC早期诊断密切相关的蛋白标志物。
结果发现，VMC组与Control组血浆外泌体蛋白组相比较，共筛选出10个差异蛋白点，包括8个上调蛋白点，2个下调蛋白点。经质谱鉴定后，表达上调的蛋白包括角蛋白2（KRT2）、角蛋白5（KRT5）、角蛋白9（KRT9）、角蛋白77（KRT77）、角蛋白78（KRT78）、锌-α2糖蛋白（AZGP1）、触珠蛋白（HP）和视黄醇结合蛋白4（RBP4）；表达下调的蛋白是CD5抗原样蛋白（CD5L）和补体C1q亚基B（C1QB）。选取RBP4进行ELISA验证，结果表明，与Control组[（64.5±2.6）μg/L]相比较，VMC组[（148.7±3.9）μg/L]血浆外泌体中RBP4特异性表达上调（P<0.05），与DIGE结果一致。
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项目成果
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