原位PCR实验的大致过程
大致过程
实验用的标本是新鲜组织、石蜡包埋组织、脱落细胞、血细胞等。其基本方法为多聚甲醛固定组织或细胞,蛋白酶消化处理组织;在组织细胞片上滴加PCR反应液进行扩增,覆盖并加液体石蜡后,在原位PCR仪上进行PCR循环扩增,PCR扩增结束后用标记的探针进行原位杂交,最后显微镜观察结果。
实验玻片的处理
清洁液清洗→自来水冲,烘干→强酸24h→自来水,蒸馏水洗,烘干95%乙醇数小时→烘干,高压消毒。再用多聚赖氨酸APES(3-氨丙基三乙氧硅烷)包被。
固定液的选择标准:保持组织结构,最大限度地保持细胞内DNA或RNA水平,使引物和探针更易于进入细胞内,在规定的时间内进行反应。
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