高速逆流色谱结合UNIFAC数学模型分离纯化淡竹叶中槲皮素
［摘要］ 目的:建立一个经济有效的方法用于淡竹叶Lophatherum gracile 中槲皮素-3-O-葡萄糖苷的分离纯化。方法:采用高速逆流色谱( high-speed counter-current chromatography，HSCCC) 进行分离纯化，所用溶剂体系为乙酸乙酯-正丁醇-水(2∶ 1∶ 3) ，其上相和下相是根据UNIFAC 数学模型单独配制，并与传统配制方法配制所得溶剂系统的分离效率进行比较;分离所得产物的纯度经HPLC 检测，结构经MS，UV，NMR 鉴定。结果:HSCCC 使用UNIFAC 数学模型单独配制的溶剂系统成功的从竹叶中制备出纯度高于99% 的槲皮素-3-O-葡萄糖苷，与传统溶剂系统配制方法相比，节省了乙酸乙酯、正丁醇和水的用量。结论:在淡竹叶中槲皮素-3-O-葡萄糖苷的HSCCC 分离过程中，使用UNIFAC 单独配制的溶剂系统既可保证较好分离效果，又可节省大量的有机溶剂，减少了资源浪费，益于环保。
淡竹叶是禾本科植物Lophatherum gracile Brongn 的干燥叶，其主要活性成分为黄酮及其苷类、三萜类、多糖等［1-3］。其中，黄酮类成分如槲皮素-3-O-葡萄糖苷是竹叶的主要成分，它具有治疗心肌缺血、缺氧的生理活性［4-5］，除此之外它还作为一个指标性成分用于淡竹叶的质量控制［6］。采用传统的分离纯化技术，如硅胶柱、聚酰胺、氧化铝等柱色谱法分离制备淡竹叶中高纯度黄酮类化合物，不仅费时、费力，且所得产物纯度较低［7］。因此建立高效、快速的现代分离技术用于淡竹叶中槲皮素-3-O-葡萄糖苷的分离纯化很有必要。
高速逆流色谱( high-speed counter-current chromatography，HSCCC) 是由美国国立卫生院YoichiroIto 博士首先研制和应用，并于20 世纪80 年代末90年代初逐步发展起来的一种建立在流体动力学基础上的连续液-液分配色谱技术［8-10］。它作为一种高效、快速和污染小的分离纯化技术而倍受关注，目前已被广泛应用于生化、生物工程、医药学、天然产物化学、有机合成和食品化学等领域［11-14］。通常情况下，HSCCC 对目标化合物的分离需要大量的流动相来执行，特别是一些复杂样品的长时间的纯化过程［15］。采用传统模式配制足够量流动相的同时往往会造成部分固定相的闲置和浪费，而采用UNIFAC数学模型辅助单独配制溶剂系统的方法可以帮助解决两相溶剂系统配制方面的试剂浪费问题［16］。
UNIFAC( universal quasichemical functional group activity coefficient) 为通用准化学官能团活度系数模型，由Fredenslund 和Prausnitz 等于1975 年提出［17］。该模型建立在基团作用的基础之上，已被广泛应用在预测相组成的各个领域［18-20］，尤其适用于单独配制溶剂系统的上相和下相。它可根据相平衡原则，计算溶液的活性系数和相关参数，从而单独配制溶剂系统［21］。作者曾采用这种UNIFAC 数学模型辅助单独配制溶剂系统的方法，成功从穿山龙中分离纯化出薯蓣皂苷［16］。本研究首次采用HSCCC 和UNIFAC 数学模型辅助单独配制的溶剂系统成功从淡竹叶分离出纯度高于99% 的槲皮素-3-O-葡萄糖苷，进一步证明该溶剂系统配制方法可以节省溶剂，益于环保。
